Estudio de la trabeculectomía experimental mediante implante de PLGA como dispositivo de liberación controlada de fármacos

225 p. : il.El principal factor limitante de la cirugía del glaucoma reside en el exceso de cicatrización, que favorece el cierre de la fístula quirúrgica, dando lugar a la elevación de la presión intraocular (PIO). En la práctica, a fin de incrementar la funcionalidad de la técnica, empleamos intraoperatoriamente antimitóticos como la mitomicina C (MMC) u 5-fluorouracilo (5FU). Sin embargo, a pesar de que su empleo ha mejorado la supervivencia de la técnica, esta tiende a fracasar con el paso del tiempo. El trabajo que planteamos consiste en el diseño y evaluación in vitro e in vivo de un implante de ácido poliglicólico-láctico (PLGA) para su empleo como dispositivo de liberación controlada de fármacos como tratamiendo coadyuvante de la cirugía del glaucoma en el ojo del conejo. ESTUDIO IN VITRO: 1. Métodos Tras el estudio de la citotoxicidad del 5FU y MMC sobre dos líneas celulares (SIRC, correspondiente a fibroblastos de conejo y WKD, correspondiente a epitelio conjuntival humano), se decidió emplear la MMC como antimitótico a encapsular. Se formularon microesferas de PLGA cargadas con MMC mediante el método de evaporación/extracción de solvente, a partir de una doble emulsión. Posteriormente se elaboraron los implantes por agregación de microesferas. Tanto las microesferas como los implantes fueron caracterizados mediante difractometría, microscopía óptica y electrónica. Finalmente los implantes fueron congelados, liofilizados y esterilizados mediante radiación gamma. La integridad de la MMC tras el proceso de manufactura del implante fue comprobada mediante el estudio de citotoxicidad sobre células SIRC y WKD. 2. Resultados: Una vez determinada la idoneidad de la MMC, se determinó su concentración de encapsulación (1,04 μg/ml). Se formularon micropartículas de PLGA 50:50 con una distribución unimodal de tamaños (rango: 2-60 μm). Se elaboraron implantes con una distribución homogénea de micropartículas en su espesor. Se evidenció que la MMC conservaba su efecto citotóxico sobre ambas líneas celulares tras ser liberada por el implante. Se evidenció mediante estudios de citotoxicidad que el implante liberaba MMC durante 6 semanas, mediante una cinética de orden 0, con una eficiencia de encapsulación del 47,6%. ESTUDIOS IN VIVO: 1. Métodos: Cuarenta y dos conejos albinos New Zealand fueron intervenidos bilateralmente, bajo anestesia general mediante trabeculectomía (OD control). Los tratamientos coadyuvantes empleados (OI; n=6 en cada grupo) fueron los siguientes: MMC 0.4 mg/ml tópica (grupo 1), 5FU 50 mg/ml subconjuntival (grupo 2), implante sin carga farmacológica (grupo 3), implante cargado y recubierto con MMC (grupo 4), implante cargado con MMC y recubierto con 5FU (grupo 5), bevacizumab (BVZ), 0,05 ml subconjuntival (grupo 6), implante cargado con MMC y BVZ subconjuntival (grupo 7). El grupo control correspondió a los OD de los animales mencionados (n=42). El seguimiento se realizó preoperatoriamente, en el postoperatorio inmediato y al cabo de 1, 5, 7, 21 y 28 días de la cirugía. Las variables estudiadas fueron la PIO (medida mediante tonometría de rebote) y las características de la ampolla filtrante (altura, extensión y vascularidad), determinadas por la clasificación (Moorfields Grading System). Los grupos con implante fueron excluidos del estudio del tamaño de la ampolla, por el efecto espaciador del implante. Al cabo de un mes, tras el sacrificio de los animales, se procedió a la enucleación y estudio histológico mediante tinción de hematoxilina-eosina y Verhoeff. 2. Resultados: La trabeculectomía experimental sin tratamiento coadyuvante (grupo control) permitió reducir la PIO de forma reproducible (supervivencia de 11,9 días), así como favorecer la formación de ampolla filtrante (supervivencia de 12,9 días). La MMC tópica (grupos 2) fue el segundo tratamiento más hipotensor (supervivencia de 21,6 días) y el primero en formación de ampolla (22 días).El grupo con 5FU tópico fue el tercero más hipotensor (16,6 días) y el segundo en formación de ampolla (14,1 días). El empleo de implantes sin carga demostró un efecto espaciador (efecto hipotensor durante 13,1 días), evidenciando una reducción de la PIO superior al grupo control y grupo 6. Los implantes con MMC encapsulada y en el recubrimiento lograron los mejores resultados hipotensores (22 días). Presumiblemente, el descenso inicial de la PIO derivaría del recubrimiento de MMC, y el descenso sostenido se debería a la degradación de las microesferas. El 5FU en los implantes mostró una efectividad similar a la dl 5FU tópico, evidenciándose una ausencia de sinergia entre MMC y 5FU. El BVZ mostró el menor efecto hipotensor (11,3 días), con una vascularidad de ampolla similar a la de los controles. El implante cargado con MMC y combinado con BVZ presentó un efecto hipotensor similar al del 5FU tópico (16,6). Dados los resultados clínicos (hiperemia conjuntival severa) e histológicos (persistencia y encapsulación del implante) de este grupo podríamos hablar de un antagonismo BVZ-MMC.Trabajo de investigación financiado por el Ministerio de Ciencia e Innovación (PPT-010000-2009-30