Evaluación de nemátodos entomopatógenos (Rhabditida : Steinernematidae y Heterorhabditidae) para el control de Phyllophaga elenans (Coleoptera : Melolonthidae : Melolonthinae)

Rodríguez García, D. & Torres Zamora, M. (2008). Evaluación de nemátodos entomopatógenos (Rhabditida: Steinernematidae y Heterorhabditidae) para el control de Phyllophaga elenans (Coleoptera: Melolonthidae: Melolonthinae). [Tesis de Licenciatura]. Universidad Nacional, Costa Rica.Con el fin de evaluar la susceptibilidad de larvas de Pkyllophaga elenans a la aplicación de cepas nativas de nemátodos entomopatógenos (NEP), se realizaron aislamientos a partir de 38 muestras de suelo provenientes de diferentes agroecosistemas del país. Los NEP se extrajeron utilizando larvas de Galleria mellonella y Tenebrio mollitor como insectos cebo y de las 12 cepas de nemátodos extraídas, se evaluaron seis cepas por su efecto sobre larvas de Phyllophaga elenams en segundo estadío (L2). La cepa que provocó un mayor porcentaje de mortalidad se utilizó en distintas concentraciones para evaluar su patogenicidad sobre larvas de Phyllophaga elenans en segundo (L2) y tercer estadío (L3). De todas las muestras de suelo analizadas, se extrajeron NEP de 12 de ellas (31.6%), distribuidas en un 75% de los 12 agroecosistemas estudiados. El porcentaje de muestras positivas resultó bastante alto en comparación con los resultados obtenidos en otros países, quizás debido a que la mayoría de los agroecosistemas tenían un manejo orgánico, lo que favorece la presencia de insectos hospederos para NEP. De las seis cepas evaluadas, la que provocó la mayor mortalidad (60%) fue la cepa N* 7, perteneciente al género Heterorhabditis proveniente del agroecosistema denominado “Cerca Arbolada”. Cuando se aplicaron diferentes concentraciones de la cepa N 7 se observaron diferencias significativas en la mortalidad de las larvas L2 de Phyllophaga elenans. Todas las concentraciones causaron una mortalidad significativamente mayor que el testigo. La dosis que ocasionó la mayor mortalidad a los ocho días de iniciado el ensayo (56%) para L2 fue la de 125 nem/ml, y la menor mortalidad estuvo asociada con la dosis de 25 nem/ml (24%). La mortalidad causada por la dosis de 125 nem/ml fue significativamente mayor que la dosis de 25 nemíml, pero no se diferenció estadísticamente de las otras dosis. En el caso del testigo, no ocurrió mortalidad. Para la concentración de 125 nem/ml el tiempo letal medio (TLso) fue de 7.5 días, para la de 100 nem/ml 8.5 días y para la de 50 nem/ml 17.5 días, con la dosis de 25 nem/ml no se logró obtener la TLso. En el caso de la dosis letal media (DLso), se pudo observar que a los ocho días ésta correspondió a 95 nem/ml (475 nemátodos). En el caso de las larvas L3 no se encontraron diferencias significativas en los porcentajes de mortalidad con respecto a las concentraciones de nemátodos utilizadas. El mayor porcentaje de mortalidad correspondió a un 28% con la dosis de 125 není/ml al término del ensayo y los menores porcentajes fueron de un 4% para las dosis de 25 y 50 nemí/mil. En este caso, debido a la baja mortalidad, no se alcanzaron los valores correspondientes a la DLso y TLso. La diferencia observada en los porcentajes de infección entre larvas L2 y L3 puede deberse a factores inmunológicos así como, a mecanismos de defensa o escape que ocurren en el estadío larval L3, por ejemplo, la cutícula de las larvas en estadío L3 es difícil de penetrar por su grosor. Estos resultados indican que la cepa N 7 es efectiva bajo condiciones controladas contra Phyllophaga elenans, por lo que deben realizarse estudios a nivel de campo a fin de evaluar su potencial como biocontrolador.In order to evaluate the susceptibility of Pkyllophaga elenans larvae to the application of native strains of entomopathogenic nematodes (NEP), isolations were made from 38 soil samples from different agroecosystems in the country. The NEP were extracted using larvae of Galleria mellonella and Tenebrio mollitor as bait insects and of the 12 strains of nematodes extracted, six strains were evaluated for their effect on second instar (L2) larvae of Phyllophaga elenams. The strain that caused the highest percentage of mortality was used in different concentrations to evaluate its pathogenicity on Phyllophaga elenans larvae in the second (L2) and third instars (L3). Of all the soil samples analyzed, NEP was extracted from 12 of them (31.6%), distributed in 75% of the 12 agroecosystems studied. The percentage of positive samples was quite high compared to the results obtained in other countries, perhaps because most of the agroecosystems had organic management, which favors the presence of host insects for NEP. Of the six strains evaluated, the one that caused the highest mortality (60%) was strain N* 7, belonging to the genus Heterorhabditis from the agroecosystem called "Cerca Arbolada". When different concentrations of strain N 7 were applied, significant differences were observed in the mortality of L2 larvae of Phyllophaga elenans. All concentrations caused significantly higher mortality than the control. The dose that caused the highest mortality eight days into the trial (56%) for L2 was 125 nem/ml, and the lowest mortality was associated with the 25 nem/ml dose (24%). Mortality caused by the 125 nem/mL dose was significantly higher than the 25 nem/mL dose, but was not statistically different from the other doses. In the case of the control, no mortality occurred. For the 125 nem/ml concentration, the median lethal time (TLso) was 7.5 days, for the 100 nem/ml 8.5 days and for the 50 nem/ml 17.5 days, with the 25 nem/ml dose it was not observed. managed to get the TLso. In the case of the median lethal dose (DLso), it was observed that at eight days it corresponded to 95 nem/ml (475 nematodes). In the case of L3 larvae, no significant differences were found in the mortality percentages with respect to the concentrations of nematodes used. The highest percentage of mortality corresponded to 28% with the dose of 125 nemí/ml at the end of the trial and the lowest percentages were 4% for the doses of 25 and 50 nemí/mil. In this case, due to the low mortality, the values ​​corresponding to the DLso and TLso were not reached. The difference observed in the percentages of infection between L2 and L3 larvae may be due to immunological factors as well as defense or escape mechanisms that occur in the L3 larval stage, for example, the cuticle of L3 stage larvae is difficult to penetrate. for its thickness. These results indicate that strain N 7 is effective under controlled conditions against Phyllophaga elenans, therefore field studies should be carried out in order to evaluate its potential as a biocontrol.Universidad Nacional, Costa RicaEscuela de Ciencias Biológica