Caracterização bioquímica e estrutural da enzima triose fosfato isomerase em larvas do mosquito Aedes Aegypti

O mosquito Aedes aegypti é vetor da dengue e da febre amarela. Nos últimos anos a dengue no Brasil e principalmente no estado do Rio de Janeiro tem atingido índices epidemiológicos alarmantes com milhares de pessoas infectas e muitos óbitos. Neste sentido, novos métodos de controle do vetor são necessários e podem ser atingidos por uma melhor compreensão do ciclo de vida desse inseto. A literatura mostra que a enzima Triose Fosfato Isomerase (TIM) tem sido usada como alvo para desenvolvimento de drogas antiparasitárias, como em: Carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus, Plasmodium falsiparum, Entamoeba Histolytica e Trypanosoma cruzi. Neste trabalho realizamos a clonagem dessa enzima, confirmada através do sequenciamento, construção de um modelo tridimensional baseado na modelagem por homologia de sequências, medição da atividade específica da enzima em todo o ciclo de vida do mosquito A. Aegypti, onde observamos maior atividade enzimática na fase larval, sendo assim o principal alvo para o controle da população do mosquito. A TIM é uma enzima da via glicolítica que catalisa a interconversão de gliceraldeído-3-fosfato a dihidroxiacetona-fosfato, sendo uma enzima evolutivamente conservada em todos os organismos, como mostrado pelo nosso experimento de alinhamento de sequências de nucleotídeos e aminoácidos. A comparação entre as sequências de aminoácidos da TIM do mosquito Aedes aegypti (AeTIM) e TIM de H. sapiens mostrou que os resíduos 66, 127 e 217 são comuns às duas enzimas. Entretanto, as cisteínas 7, 25, 43 e 143 são exclusivos da AeTIM. Os nossos resultados de modelagem molecular mostram que a cisteína 143 esta em uma região de fácil acesso estrutural a moléculas de baixo peso molecular. Desta forma, a cisteína 143 torna-se um bom alvo para desenvolvimento de inibidores seletivos da TIM do mosquito transmissor da dengue. Também realizamos testes com três compostos contra a larva do mosquito e obtivemos relevantes resultados. Os compostos testados foram: 3-Bromo-Piruvato, Metilmetano tiosulfanato (MMTS) e Ácido 5,5´-ditio-bis2-nitrobenzoico (DTNB). Acreditamos que o conjunto dos dados deste estudo proporcionará informações importantes sobre a possibilidade de inibição seletiva de enzimas homólogas em ectoparasitos transmissores de doenças como o mosquito Aedes aegypti