Caracterización de mutantes mcm4 sensibles a daños genotóxicos

Trabajo fin de grado en Biomedicina básica u experimental, presentado en la Facultad de Medicina de la Universidad de Sevilla.--03-06-2019.--Calificación: SobresalienteLos daños en el ADN provocados por mutaciones o agentes genotóxicos comprometen la integridad genómica. Ante estos daños existen dos posibilidades; reparar y asegurar así la fidelidad de la replicación, o tolerarlos mediante mecanismos que saltan la lesión y generan fragmentos de ADN de cadena sencilla que deberán ser rellenados. Existen dos rutas en esta respuesta de tolerancia a daños en el ADN (DDT): la síntesis trans-lesión (TLS), la cual puede introducir errores y la recombinación homóloga (HR), libre de errores al utilizar como molde a la cromátida hermana. La helicasa MCM es fundamental en la replicación abriendo las cadenas de ADN. Más allá de este proceso se ha visto que MCM interacciona con las proteínas de HR Rad51/Rad52 y que dicha interacción, así como su unión a la cromatina, están moduladas por daños replicativos. Esto sugiere un papel del complejo MCM en la respuesta de DDT. Para estudiarlo, hemos caracterizado dos mutantes en el residuo 355 de la subunidad Mcm4 de la helicasa replicativa MCM, mcm4T355D (fosfomimético) y mcm4T355A (fosfomutante), previamente identificados por su sensibilidad al agente alquilante genotóxico MMS (metil metano sulfonato). Hemos observado que estos mutantes no están afectados en las rutas de TLS o HR inducida por MMS. De igual manera, progresan correctamente por la fase S en presencia de dicho agente genotóxico. Sin embargo, se paran en G2/M, lo que sugiere una función de este residuo en la resolución y/o señalización de los daños replicativos