New analytical methods for dietary supplements used to treate menopausal symptoms

Menopauza, odnosno klimakterij, sastavni je dio procesa starenja svake žene. S obzirom na sve učestaliju primjenu dodataka prehrani koji sadržavaju fitoestrogene te sve veći broj prisutnih proizvoda na tržištu, raste i interes znanstvene zajednice za ove proizvode. Rastujuću uporabu dodataka prehrani koji sadrže fitoestrogene prati i otkrivanje novih biljnih vrsta koje sadrže spomenute biološki aktivne tvari. S obzirom na navedeno, jasna je potreba za razvojem novih analitičkih metoda za određivanje i aktivnih i štetnih tvari u sirovinama koje se koriste u proizvodnji te u gotovim komercijalno dostupnim proizvodima. Ovaj je rad obuhvatio ispitivanja uzoraka hrane, biljnog industrijskog materijala te gotovih proizvoda koji sadržavaju soju i crvenu djetelinu, kao predstavnike dobro poznatih biljnih vrsta koje sadržavaju fitoestrogene te hmelja, konopljike i lana, kao predstavnike novije generacije biljnih vrsta koje sadržavaju fitoestrogene. Glavni je cilj ovog rada razviti nove, pouzdane analitičke metode namijenjene identifikaciji i određivanju sadržaja aktivnih tvari u sirovinama i dodatcima prehrani koji se koriste u ublažavanju simptoma menopauze. U radu su korištene napredne analitičke tehnike: masena spektrometrija s neposrednim unosom uzorka u sustav (engl. Direct Injection Mass Spectrometry, DI-MSn) te vezani sustav tekućinske kromatografije visoke djelotvornosti i masene spektrometrije (engl. Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry, LCMS/ MS). Identifikacija deset biološki aktivnih tvari provedena je primjenom DI-MSn tehnike, dok je istodobno određivanje jedanaest biološki aktivnih tvari osigurano primjenom LCMS/ MS tehnike. Nadalje, uz navedene tehnike u radu je korištena i UV/VIS spektrofotometrija. Folin–Ciocalteu metoda primijenjena je za određivanje sadržaja ukupnih polifenola dok je antioksidacijski učinak ispitan primjenom DPPH, ABTS i RPA metoda. Analizom ispitanih uzoraka utvrđene su velike razlike u sadržaju bioloških aktivnih tvari između uzorka te su kod pojedinih uzoraka nađene i razlike u sadržaju bioloških aktivnih tvari između različitih proizvodnih serija.Menopause is an integral part of every woman's aging process. Given the increasing use of phytoestrogen-containing dietary supplements and the growing number of products available on the market, the interest of the scientific community for these products is growing. Moreover, the growing interest is accompanied by the research of new plant species that contain these biologically active substances. In the light of the above mentioned, new analytical methods for the determination of both active and toxic substances in raw materials and finished products are essential. This work includes analysis of food samples, dietary supplement raw materials and dietary supplements containing soybean and red clover, as representatives of the well-known species containing phytoestrogens and hops, chaste tree and flax, as representatives of the new generation of species containing phytoestrogens. The main goal of this thesis was to develop new, reliable analytical methods for the identification and determination of active substances in raw material and finished dietary supplement products used in the alleviation of menopausal symptoms. For this purpose, sophisticated analytical techniques were used: Direct Injection Mass Spectromety (DI-MSn) and Liquid Chromatography – Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS). Identification of ten biologically active substances was performed using the DI-MSn technique, while the simultaneous determination of eleven biologically active substances will achieved using the LC-MS/MS technique. Furthermore, UV/VIS spectrometry was used in this work. Folin– Ciocalteu method was applied for determination of total polyphenol content, while antioxidant efficacy was evaluated using DPPH, ABTS and RPA methods. According to our results high variability in biologically active compound content was found among investigated products as well as high batch-to-batch variability for several products