Detection of a Bovine Genetic Defect by a DNA Probe

The adhesion deficiency of bovine leukocytes to antigens, known as BLAD (bovine leukocyte adhesion deficiency), is a hereditary genetic disease which is lethal for the Holstein breed. It is a recessive autosomal disease that can be transmitted to the offspring. The objective of this research was to standardize the molecular techniques to diagnose BLAD and also to get a first approximation of the genetic frequency of the mutated allele in the bull population of the IX th and X th Regions. DNA amplification using polymerase chain reaction (PCR) and posterior digestion with restriction enzymes Taq I and Hae III was performed. The digested product was analyzed by 4% agarose gel electrophoresis and ethidium bromide staining to show the typical restriction fragments present in normal, carrier and infected cattle. The technique was validated with a screening test of 59 cattle. Out of 55 bulls analyzed, one turned out to be a BLAD carrier, which suggests a genetic frequency of 1.79% in the bull population of the IX th and X th Regions. The diagnostic technique of PCR and the digestion of the amplification product with two restriction enzymes ( Taq I and Hae III) has identified with accuracy the genotype of cattle at a specific locus and allows an early identification of the genetic defect known as BLAD in infected and carrier animals.La deficiencia en la capacidad de uni\uf3n de leucocitos bovinos a los ant\uedgenos, m\ue1s conocida como BLAD, es una enfermedad hereditaria que resulta letal para el ganado de la raza Holstein. Su principal caracter\uedstica es ser una enfermedad autos\uf3mica recesiva que puede ser transmitida a la descendencia. El objetivo del trabajo fue estandarizar la metodolog\ueda para realizar un diagn\uf3stico de la enfermedad mediante t\ue9cnicas moleculares y lograr una primera aproximaci\uf3n sobre la frecuencia g\ue9nica del alelo mutado en algunas poblaciones de toros de la IX y X Regi\uf3n. En base a la amplificaci\uf3n del ADN mediante reacci\uf3n en cadena de polimerasa (PCR) y posterior digesti\uf3n con enzimas de restricci\uf3n Taq I y Hae III, fue posible visualizar, mediante electroforesis en gel de agarosa al 4%, los fragmentos de restricci\uf3n caracter\uedsticos para bovinos normales, portadores o enfermos. La t\ue9cnica se valid\uf3 mediante un muestreo de 59 bovinos. De los 55 toros analizados uno result\uf3 ser portador de BLAD, lo que implica una frecuencia g\ue9nica de 1,79% en la poblaci\uf3n de toros de la IX y X Regi\uf3n. La t\ue9cnica de PCR acoplada a la digesti\uf3n con enzimas de restricci\uf3n ( Hae III y Taq I) ha demostrado que identifica inequ\uedvocamente el genotipo del ganado en un locus determinado y permite el diagn\uf3stico certero y precoz de aquellos animales enfermos y/o portadores del defecto hereditario conocido como BLAD