Subkloning Gen HexaPro Foldon Spike SARS-CoV-2 ke Vektor Ekspresi Pichia pastoris pD902

Salah satu strategi yang dapat digunakan untuk mengendalikan dan mencegah penularan Coronavirus Disease 19 (COVID-19) adalah vaksinasi. Pengembangan vaksin COVID-19 dapat dilakukan menggunakan vaksin subunit berbasis protein spike SARS-CoV-2 rekombinan. Salah satu pendekatan yang dapat digunakan dalam pengembangan vaksin SARS-CoV-2 berbasis protein spike adalah penggunaan platform vaksin protein rekombinan. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan subkloning gen HexaPro Foldon Spike SARS-CoV-2 ke vektor ekspresi Pichia pastoris pD902 sebagai kandidat vaksin SARS-CoV-2 menggunakan sejumlah teknik molekuler. Gen HexaPro Foldon Spike SARS-CoV-2 berukuran 3624 bp diamplifikasi menggunakan teknik PCR dari plasmid rekombinan pαH-SARS-CoV-2 S HexaPro. DNA insert yang diperoleh kemudian disubkloning ke vektor kloning pGEM-T dan pTA2 menggunakan teknik TA-cloning. Plasmid rekombinan yang diperoleh kemudian diperbanyak. Gen HexaPro Foldon Spike SARS-CoV-2 diisolasi untuk dilakukan subkloning ke vektor ekspresi Pichia pastoris pD902 yang memiliki promotor AOX1. Hasil ligasi gen HexaPro Foldon Spike dan plasmid pD902 digunakan untuk transformasi sel kompeten Escherichia coli DH5α dan E. coli Top10F’. Hasil transformasi diinkubasi pada suhu 37oC selama 16 jam pada media LB agar yang mengandung Zeocin dengan konsentrasi akhir 100 µg/ml. Hasil inkubasi menunjukkan tidak ada koloni transforman yang diperoleh. Hasil yang diperoleh menunjukkan subkloning gen protein HexaPro Foldon Spike SARS-CoV-2 ke vektor ekspresi Pichia pastoris pD902 tidak berhasil dilakukan pada komposisi reaksi ligasi dengan rasio insert:vektor 3:1, 10:1, 1:1, dan 2:2 dan dengan menggunakan sel E. coli Top10F’ dan E. coli DH5