Producing by hybridoma technology monoclonal antibodies against proteins bank vole's CD8 and human MCPIP-2

Przeciwciała monoklonalne są cząsteczkami biologicznymi o ogromnym znaczeniu zarówno w medycynie jak i w badaniach naukowych. Opracowana technologia hybrydoma była kamieniem milowym w biotechnologii. Jej zasada opiera się na unieśmiertelnieniu limfocytów B pozwalając na otrzymywanie przeciwciał monoklonalnych w ciągły sposób. Zostały przeprowadzone łącznie trzy fuzje komórkowe: I i II fuzja miała na celu powstanie komórek hybrydoma produkujących przeciwciała monoklonalne rozpoznające białko CD8 nornicy, a rezultatem III fuzji komórkowej miały być komórki produkujące przeciwciała monoklonalne skierowane przeciwko ludzkiemu białku MCPIP-2. Dla klonów z I i II fuzji przeprowadzono subklonowanie, gdzie najlepsze z nich (2B8E7, 2E10F9, 3C10F8, 3C10G9) zostały poddane etapom izotypowania przeciwciał, oczyszczania pożywki i określania ich stężenia. Otrzymane oczyszczone przeciwciała mogły być użyte do dalszych analiz z wykorzystaniem cytometrii przepływowej. W trakcie prac badawczych udało się wyselekcjonować i zabezpieczyć komórki hybrydoma produkujące przeciwciała rozpoznające MCPIP-2, ale ze względu na ograniczenia czasowe nie przeprowadzono etapów subklonowania komórek hybrydoma, oczyszczania i izotypowania przeciwciał.Monoclonal antibodies are biological molecules of great importance in both medicine and research. Developed hybridoma technology was a milestone in biotechnology. Principle is based on the immortalization of B lymphocytes, thus enable obtaining monoclonal antibodies in a continuous manner. A total of three cell fusions were carried out: I and II fusions were aimed at the creation of hybridoma cells producing monoclonal antibodies recognizing the CD8 protein of the voles, and the result of the III cell fusion was meant to produce cells secreting monoclonal antibodies directed against the human MCPIP-2 protein. For clones from I and II fusions, subcloning was performed, the best of which (2B8E7, 2E10F9, 3C10F8, 3C10G9) were subjected to antibody isotyping, media purification and assessing concentration of antibodies. The obtained purified antibodies could be used for further analyzes using flow cytometry. During the research work, it was possible to select and freeze hybridoma cells which produce antibodies that recognize MCPIP-2, but due to time constraints, the steps of hybridoma cell subcloning, antibody purification and isotyping were not conducted