Efecto del KnockOut™ Serum Replacement y del suero fetal bovino en el cultivo y criotolerancia de embriones bovinos producidos in vitro

Se propuso como objetivo de esta investigación evaluar el efecto del KnockOut™ Serum Replacement como sustituto del suero fetal bovino en la producción y congelación de embriones bovinos producidos in vitro. Se recolectaron ovarios postmortem y se transportaron al laboratorio Singamia donde se obtuvieron los complejos ovocito-cúmulo (COCs). Los COCs (n=1798) fueron madurados y fecundados in vitro (FIV), y los presuntos embriones fueron incubados por 6 días en un medio de cultivo suplementado con 5% de KnockOut™ Serum Replacement (KSR; n=589), o 5% de Suero Fetal Bovino (SFB; n=555), o 0,6% de albúmina sérica bovina (BSA; n=654). En el día 7 luego de la FIV, los embriones fueron clasificados y los de calidad 1 fueron congelados y almacenados en nitrógeno líquido. Un grupo de embriones fue descongelado y sometido a una doble tinción fluorescente (yoduro de propidio y Hoechst) para determinar el número total de blastómeras, y el número de blastómeras intactas y con alteración de la membrana plasmática. Otro grupo de embriones fue descongelado e incubado por 72 horas para determinar la sobrevivencia embrionaria a las 4, 24, 48 y 72 horas postdescongelación. Los embriones cultivados con SFB (P=0,0214) y KSR (P=0,0681) produjeron mayor porcentaje de blastocistos y menor proporción de mórulas y blastocistos tempranos que BSA (P<0,05). Del grupo SFB se produjo un porcentaje mayor de blastocistos regulares que KSR y BSA. Luego de la descongelación los embriones cultivados con KSR tuvieron menor número y proporción de células alteradas que los SFB y BSA (P<0,05). La tasa de reexpansión y eclosión a las 4, 24, 48 y 72 horas fue significativamente menor en los embriones cultivados con SFB y KSR que con BSA, siendo los de KSR los que lograron menor tasa de sobrevivencia. En conclusión, con la adición de KSR o SFB se obtuvo mayor proporción de blastocistos y menor proporción de embriones en estadios tardíos de desarrollo que BSA. Aunque se observó una menor proporción de células alteradas en KSR, este grupo y SFB experimentaron menor tasa de sobrevivencia pos-descongelación que BSA.The objective of this research was to evaluate the effect of KnockOut™ Serum Replacement as a substitute for fetal bovine serum in the production and freezing of bovine embryos produced in vitro. Ovaries were collected postmortem and transported to the Singamia laboratory where oocyte-cumulus complexes (COCs) were obtained. The COCs (n=1798) were matured and fertilized in vitro (IVF), and the presumptive embryos were incubated for 6 days in culture medium supplemented with 5% KnockOut™ Serum Replacement (KSR; n=589), or 5% Fetal Bovine Serum (SFB; n=555), or 0.6% bovine serum albumin (BSA; n=654). On day 7 after IVF, embryos were sorted and quality 1 embryos were frozen and stored in liquid nitrogen. One group of embryos was thawed and subjected to fluorescent double staining (propidium iodide and Hoechst) to determine the total number of blastomeres, and the number of intact and plasma membrane disrupted blastomeres. Another group of embryos was thawed and incubated for 72 hours to determine embryo survival at 4, 24, 48 and 72 hours post-thawing. Embryos cultured with SFB (P=0.0214) and KSR (P=0.0681) produced a higher percentage of blastocysts and a lower proportion of morulae and early blastocysts than BSA (P<0.05). From the SFB group, a higher percentage of regular blastocysts was produced than KSR and BSA. After thawing, embryos cultured with KSR had a lower number and proportion of altered cells than SFB and BSA (P