Perfil sanitário das populações de passeriformes dos campos sulinos com foco na reintrodução de espécie criticamente ameaçada de extinção

Orientadora: Professora Dra. Rosangela Locatelli DittrichTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa : Curitiba, 14/09/2021Inclui referênciasÁrea de concentração: Patologia VeterináriaResumo: O cardeal-amarelo, Gubernatrix cristata (VIEILLOT, 1817), está classificado no Livro Vermelho da Fauna Brasileira Ameaçada de Extinção como criticamente ameaçado. Restam 53 indivíduos de vida livre que habitam o Parque Estadual do Espinilho, não havendo monitoramento sanitário das populações, essenciais para a sua conservação. O presente trabalho foi realizado com a participação de uma equipe multidisciplinar de pesquisadores e em parceria com o Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Aves Silvestres (CEMAVE/ICMBio), e contempla ações previstas no Plano de Ação Nacional (PAN) para Conservação das Aves dos Campos Sulinos e no Programa de Cativeiro do Cardeal-amarelo (PCCA) instituídos pelo Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade (ICMBio). A presente tese está dividida em quatro capítulos. O primeiro capítulo, intitulado "Molecular diagnosis of avian viruses in grassland passerines and captive Yellow Cardinals Gubernatrix cristata in Brazil", objetivou avaliar a ocorrência de vírus da gripe aviária (VGA), vírus da doença de Newcastle (VDN), vírus do Nilo Ocidental (VNO), adenovírus (AV) e herpesvírus (HV) pela primeira vez nos passeriformes campestres do Parque Estadual do Espinilho, que abriga o cardeal-amarelo e em cardeais-amarelos do PCCA. Amostras de suabes cloacais e de orofaringe foram coletadas dos passeriformes e submetidas à extração de RNA e DNA e à reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) para VGA, VDN e VNO e nested PCR para AV e HV. Somente um cardeal-amarelo de cativeiro apresentou resultado positivo para AV. Este é o primeiro relato de AV em cardeal-amarelo e de investigação epidemiológica de vírus em passeriformes silvestres do bioma Pampa, no Rio Grande do Sul, Brasil. O segundo capítulo intitulado "Blood parasites of passerines in the Brazilian Pampas and their implications for a potential population supplementation program for the endangered Yellow Cardinal (Gubernatrix cristata)", objetivou investigar os hemoparasitas nos passeriformes campestres do Parque Estadual do Espinilho e em cardeais-amarelos do PCCA. Foram realizadas avaliações microscópicas dos esfregaços sanguíneos dos passeriformes para identificar e caracterizar morfologicamente os parasitas hemosporídeos, nos quais foi observada uma prevalência de 10,9% nos passeriformes de vida livre, compreendendo a morfoespécie Haemoproteus erythrogravidus em Tico-tico (Zonotrichia capensis), H. quiscalus em Asa-detelha- escuro (Agelaioides badius), e H. tyranni em Bem-te-vi (Pitangus sulphuratus); estes são os registros mais ao sul para essas morfoespécies, e seus primeiros registros para o bioma Pampa. Não foram detectados parasitas hemosporídeos nos esfregaços de sangue de cardeais-amarelos, selvagens ou de cativeiro. A presença de microfilárias foi de 14,1% nos passeriformes selvagens e 43,3% em cardeais-amarelos cativos. Um cardeal-amarelo cativo estava parasitado por Trypanosoma sp., que foi detectado no esfregaço sanguíneo. A PCR aninhada e o sequenciamento do gene cyt-b de Haemoproteus/Plasmodium foram usados para testar um subconjunto de passeriformes selvagens e cardeais-amarelos cativos, permitindo o código de barras molecular da linhagem de H. quiscalus AGEBAD04 e da linhagem de H. tyranni PITSUL01; adicionalmente, DNA idêntico ao da linhagem PITSUL01 foi detectado no sangue de um cardeal-amarelo cativo. Este é o primeiro relato de microfilárias e Trypanosoma sp. em cardeal-amarelo. O terceiro capítulo, "Parâmetros leucocitários de cardeais-amarelos (Gubernatrix cristata) silvestres e cativos no Brasil", objetivou avaliar os parâmetros leucocitários em cardeaisamarelos do PCCA e de vida livre. Amostras de sangue foram coletadas da veia ulnar de 33 cardeais-amarelos para confecção do esfregaço sanguíneo para avaliação leucocitária. Este estudo estabeleceu parâmetros de referência para o diferencial de leucócitos de cardeais-amarelos de vida livre e de cativeiro, verificou-se relação de heterófilo:linfócito média de 0,97 nos cardeaisamarelos cativos e 0,74 nos cardeais-amarelos de vida livre. O quarto capítulo "Microbiota cloacal e de orofaringe de cardeais-amarelos (Gubernatrix cristata) silvestres e cativos no Brasil" objetivou avaliar a microbiota cloacal e de orofaringe de cardeais-amarelos silvestres do Parque Estadual do Epinilho e do PCCA. Foram coletadas amostras de microbiota cloacal e de orofaringe de 30 cardeais-amarelos cativos e três cardeais-amarelos silvestres para análises microbiológicas e identificação de enterobactérias. Das amostras de microbiota oral e cloacal dos cardeais-amarelos foram isoladas 152 colônias de bactérias, nos indivíduos silvestres e de cativeiro a predominância de crescimento nas culturas foi de bactérias gram-negativas, sendo de 55,6% e 76,6% respectivamente. Esses resultados fornecem subsídios e suporte nas decisões à conservação dessa espécie ameaçada de extinção e ajudam a compreender o estado de saúde dos passeriformes selvagens que coexistem nesse bioma, que é o único dos cardeais-amarelos no Brasil.Abstract: The Yellow Cardinal, Gubernatrix cristata (VIEILLOT, 1817), is classified in the Red Book of Brazilian Fauna Threatened with Extinction as critically endangered. There remain 53 free-living individuals that inhabit the Espinilho State Park, with no sanitary monitoring of the populations, essential for its conservation. This work was carried out with the participation of a multidisciplinary team of researchers and in partnership with the "Centro Nacional de Pesquisa e Conservação de Aves Silvestres" (CEMAVE/ICMBio), and includes actions based on the "Plano de Ação Nacional (PAN) para Conservação das Aves dos Campos Sulinos" and in the "Programa de Cativeiro do Cardeal-amarelo" (PCCA) established by the "Instituto Chico Mendes de Conservação da Biodiversidade" (ICMBio). This thesis is divided into four chapters. The first chapter, entitled "Molecular diagnosis of avian viruses in grassland passerines and captive Yellow Cardinals Gubernatrix cristata in Brazil", aimed to evaluate the occurrence of avian influenza virus (AIV), Newcastle disease virus (NDV), West Nile virus (WNV), adenovirus (AV) and herpesvirus (HV) for the first time in grassland passerines in the Espinilho State Park, which houses the Yellow Cardinal and in Yellow Cardinals maintained by the PCCA. Samples of cloaca and oropharynx swabs were collected from passerines and subjected to RNA and DNA extraction and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) for AIV, NDV and WNV and nested PCR for AV and HV. Only one captive Yellow Cardinal tested positive for AV. This is the first report of AV in Yellow Cardinal and of an epidemiological investigation of viruses in wild passerines from the Pampa biome, in Rio Grande do Sul, Brazil. The second chapter, entitled "Blood parasites of passerines in the Brazilian Pampas and their implications for a potential population supplementation program for the endangered Yellow Cardinal (Gubernatrix cristata)", aimed to investigate the hemoparasites in grassland passerines from Espinilho State Park and in PCCA Yellow Cardinals. Microscopic evaluations of the blood smears of the passerines were performed to identify and morphologically characterize the hemosporidian parasites, in which a prevalence of 10,9% was observed in free-living passerines, comprising the morphospecies Haemoproteus erythrogravidus in Rufous-collared Sparrow (Zonotrichia capensis), H. quiscalus in Grayish Baywing (Agelaioides badius), and H. tyranni in Great Kiskadee (Pitangus sulphuratus); these are the southernmost records for these morphospecies, and their first record for the Pampas biome. No haemosporidian parasites were detected in the blood smears of Yellow Cardinals, wild or captive. Microfilariae were detected in the blood smears of 14.1% of the wild passerines, and in 43.3% of captive Yellow Cardinals. Trypanosoma sp. was detected in the blood smear of one captive Yellow Cardinal. Nested PCR and gene sequencing of the cyt-b gene of Haemoproteus/Plasmodium was used to test a subset of wild passerines and captive Yellow Cardinals, allowing for the molecular barcoding of H. quiscalus lineage AGEBAD04 and H. tyranni lineage PITSUL01; additionally, DNA identical to that of lineage PITSUL01 was detected in the blood of one captive Yellow Cardinal. This is the first report of microfilariae and Trypanosoma sp. in Yellow Cardinal. The third chapter, "Parâmetros leucocitários de cardeaisamarelos (Gubernatrix cristata) silvestres e cativos no Brasil" aimed to evaluate the leukocyte parameters in PCCA and free-living Yellow Cardinals. Blood samples were collected from the ulnar vein of 33 Yellow Cardinals to make blood smears for leukocyte evaluation. This study established reference parameters for the differential of leukocytes from free-living and captive Yellow Cardinals, with a mean heterophil:lymphocyte ratio of 0.97 in captive Yellow Cardinals and 0.74 in free living Yellow Cardinals. The fourth chapter "Microbiota cloacal e de orofaringe de cardeais-amarelos (Gubernatrix cristata) silvestres e cativos no Brasil" aimed to evaluate the cloacal and oropharyngeal microbiota of wild Yellow Cardinals from Epinilho State Park and PCCA. Cloacal and oropharyngeal microbiota samples of 30 captive Yellow Cardinals and three wild Yellow Cardinals were collected for microbiological analysis and identification of enterobacterias. From the samples of oral and cloacal microbiota of the Yellow Cardinals, 152 colonies of bacteria were isolated, in wild and captive individuals, the predominance of growth in the cultures was of gram-negative bacterias, being 55.6% and 76.6% respectively. These results provide subsidies and support in decisions for the conservation of this endangered species and help to understand the health status of wild passerines that coexist in this biome, which is the only place with Yellow Cardinals in Brazil