光線力学的作用のMutagenicityに関する研究

山口大学医学部ヒト膀胱癌由来培養細胞株KKー47細胞よりHAT selectoonにて得られた細胞株は細胞感染が認められ,野性型細胞を用いて本研究を逐行した。光感受性物質はHpDI(Queen Elizabeths Hospital,Australia)を,培養液はEagle MEM(日水製薬)に10%中胎児血清(Microbological Association,USA)を加えたものを,照射光源はアルゴン色素レ-ザ-光(ADL,630nm,SpectraーPhysics)およびUV(UVA;300ー430nm,UVB;280ー320nm,東芝医療用機器株式会社,MーDMRー1)を用いた。HpDI処理はすべて暗室にて行った.HpDIは処理3時間で細胞毒性が認められない40μg/mlを用い,HpDI処理後ADL,lmW/cm^2,2分間照射(0.12J/cm^2)での細胞生残率は22%であり,以下この条件を用いた。UVA照射(5mW/cm^2)では6J/cm^2の照射量にて,UVB照射10.1mW/cm^2)では0.6mJ/cm^2にてそれぞれ約20%の細胞生残率であり,以下この照射量を用いた。突然変異細胞の選択薬として6ーthroguanine(6ーTG,Sigma)を用いた。10^6個/シャ-レの細胞にHpDIを接触させ,ADL照射した群,UVAまたはUVBのみを照射した群に分け,10^6個/シャ-レに分注し培養を続けた。この継代培養開始時を突然発現時間の0日目とした。継代培養0,2,4,6,8,9日目に細胞を取り出し,10^5個/シャ-レに分注し,5μg/mlとなるよう6ーTGを加え14日間培養した。同時にコロニ-形成法にて細胞生残率を求めた。UVB照射群における突然変異発現は4日目より増加し,6日目より9日目までほぼ一定であった。HpDI+ADL照射群およびUVA単独照射群の突然変異発現は9日目まで10^5個生細胞当たり8.0±52個とほぼ一定であり,無処理の対照群と変化なかった。HpDIを用いた光力学的作用には明らかなmutagenie activityは認められなかった。臨床的には,40例の難治性膀胱癌に対して光力学的治療を施行したがmutationを示唆する所見は認められなかった。Cell culture studies have been performed to compare the mutagenic potential for hematoporphyrin derivative photoradiation and UV radiation. The mutation frequency in human bladder cancer cells (KK-47) at the hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase locus was measured using resistance to 6-thioguanine. Treatment with UVB (wavelength ; 280-320 nm) was effective in producing mutants resistant to 6-thioguanine, but treatment with neither UVA (wavelength ; 300-430 nm) nor hematoporphirin derivative photoradiation (at comparable toxicity levels) using argon-dye laser (wavelength ; 630 nm) did not induce any mutagenic activity above background levels. Additional studies regarding hernatoporphyrin derivative UV radiation are needed. And in vivo carcinogenic studies will have to be performed to determine the long-term effects of hematoporphyrin derivative photoradiaton.研究課題/領域番号:02670701, 研究期間(年度):1990 – 1991出典：研究課題「光線力学的作用のMutagenicityに関する研究」課題番号02670701（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-02670701/026707011991kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作