Kloniranje, proizvodnja i prečišćavanje H6SpyTag nanoantitela za upotrebu SpyTag/SpyCatcher sistema

Ekstracelularne vezikule (EV) u poslednje dve decenije privukle su veliku pažnju naučne zajednice s obzirom na brojne funkcije koje imaju u mnogim fiziološkim i patofiziološkim procesima. Dostavljajući ćelijama različit sadržaj koji nose u svojoj unutrašnjosti kao što su proteini i nukleinske kiseline, učestvuju u međućelijskoj komunikaciji. Imaju ulogu u proliferaciji ćelija, održavanju hemostaze, mogu da moduliraju imuni odgovor, a osim toga mogu da podstiču progresiju tumora i metastaza svojim uticajem na remodelovanje matriksa, proces angiogeneze i inflamacije. Egzozomi su tip ekstracelularnih vezikula koji je privukao veliku pažnju zbog svojih osobina. Mogu se koristiti kao potencijalni terapeutici s obzirom da aktiviraju različite signalne puteve, indukuju ekspresiju brojnih faktora rasta i tako učestvuju u procesu regeneracije tkiva, a zbog svoje strukture mogu se koristiti za ciljanu dostavu lekova. Činjenica da je sastav egzozoma izmenjen u pojedinim patološkim stanjima, kao i to da se nalaze u različitim biološkim tečnostima može se iskoristiti za primenu egzozoma u razvoju novih neinvazivnih metoda dijagnostike. U ovom radu uspešno je odrađeno kloniranje dva konstrukta, SpyCatcher003.Avitag i H6SpyTag003, kao i njihova ekspresija u E.Coli ćelijama. Zahvaljujući C terminalnom histidinskom tagu, konstrukti su prečišćeni metal-afinitetnom hromatografijom, a potom je SDS poliakrilamidnom elektroforezom potvrđeno formiranje SpyCatcher003.Avitag/H6SpyTag003 kompleksa. Značaj konstrukata SpyCatcher003.Avitag i H6SpyTag003 ogleda se u njihovoj potencijalnoj primeni za imunoafinitetno prečišćavanje egzozoma, s obzirom na to da je gen za SpyTag spojen sa genom koji kodira nanoantitelo-H6, za koje je potvrđeno da prepoznaje određeni specifični površinski marker egzozoma