Exploration des réarrangements atypiques Vκ2-Vκ dans des sous-populations B ex vivo et dans un modèle de différenciation B in vitro

During B lymphopoiesis, many recombinant mechanisms are involved allowing the synthesis of immunoglobulins. The immunoglobulins are composed of two heavy and light identical chains. Within the IGK locus, mechanisms allow the association of a gene fragment of variability Vκ and junction Jκ. This mechanism is called V (D) J recombination of immunoglobulin genes. Previous work by Prof. Brigitte Gubler identified atypical rearrangements associating two Vκ genes, called Vκ2-Vκ in samples from patients with pediatric ALL-B. During this thesis work, we continued this study by focusing on the physiological appearance of Vκ2-Vκ rearrangements in sorted cell populations of cord blood. We have identified these atypical rearrangements at a frequency of between 0.5% and 1%. Our results show a preferential use of genes depending on the stage of maturation. In addition, in a new model of in vitro B-cell differentiation developed from mature stem cells in coculture with cord stromal stem cells, we found these rearrangements at a lower frequency, but having the same characteristics of preferential use of genes than previously demonstrated. These results demonstrate the existence of atypical physiological Vκ2-Vκ rearrangements and indirectly demonstrate the existence of a functional enhancer responsible for the control of atypical Vκ2-Vκ recombination, allowing diversity and revision of the repertoire IG kappa light chainsAu cours de la lymphopoïèse B, de nombreux mécanismes recombinatoires sont mis en place pour permettre la synthèse des immunoglobulines, qui sont composées de quatre chaînes protéiques : deux chaînes lourdes et deux chaînes légères identiques. Au sein du locus IGK des chaînes légères, des mécanismes entraînent l'association d'un fragment de gène de variabilité Vκ et de jonction Jκ : c’est la recombinaison V(D)J des gènes des immunoglobulines. Des travaux antérieurs du Pr Brigitte Gubler ont identifié des réarrangements atypiques associant deux gènes Vκ, appelés Vκ2-Vκ, dans les prélèvements de patients atteints de LAL-B pédiatrique. Durant ces travaux de thèse, nous avons poursuivi cette étude en nous concentrant sur l'apparition physiologique des réarrangements Vκ2-Vκ au sein de populations cellulaires triées de sang placentaire. Nous avons découvert que ces réarrangements atypiques apparaissent à une fréquence comprise entre 0,5% et 1%. Nos résultats montrent une utilisation préférentielle des gènes en fonction du stade de maturation. Dans un nouveau modèle de différenciation B in vitro développé à partir de cellules souches matures en coculture avec des cellules souches stromales issues de sang de cordon, nous avons constaté que ces réarrangements atypiques ont une fréquence inférieure (0,2%) mais qu'ils possèdent les mêmes caractéristiques d'utilisation préférentielle des gènes au cours de la différenciation B. Ces résultats démontrent l'existence de réarrangements atypiques Vκ2-Vκ physiologiques et démontrent de façon indirecte l'existence d'un enhancer fonctionnel responsable du contrôle des recombinaisons atypiques Vκ2-Vκ permettant la diversité et la révision du répertoire des chaînes légères κ des immunoglobuline