Study of transport across biological membranes

Głównym celem przedstawionej pracy było opanowanie techniki mikroiniekcji komórkowej a następnie wykorzystanie jej do wprowadzenia dwóch modelowych substancji – znaczonego fluorescencyjnie dekstranu oraz nanodiamentów do wnętrza fibroblastów linii MEF 3T3 i wykonanie wstępnych pomiarów przepuszczalności błony jądra dla molekuł dekstranu. Wykonano dwie serie wstępnych eksperymentów z wykorzystaniem mikroiniekcji. W pierwszej serii wprowadzono zawiesinę nanodiamentów do jąder komórkowych komórek adherentnych z linii MEF 3T3. W drugiej serii eksperymentów wprowadzono dekstran o masie cząsteczkowej 10 kDa do cytoplazmy.W pracy zbadano także efekty mikroiniekcji manualnej, półautomatycznej oraz wykorzystania maksymalnego ciśnienia do wprowadzenia nanodiamentów do wnętrza komórki.The main aim of the presented work was to master the technique of cellular microinjection and then to use it to introduce two model substances - fluorescently labeled dextran and nanodiamonds into the MEF 3T3 line fibroblasts and perform the initial measurements of nuclear membrane permeability for dextran molecules Two series of preliminary experiments using microinjection were performed. In the first series, the suspension of nanodiamonds was introduced into the cell nuclei of adherent cells from the MEF 3T3 line. In the second series of experiments, 10 kDa dextran was introduced into the cytoplasm.The work also investigated the effects of manual and semi-automatic microinjection and the use of maximum pressure to introduce nanodiamonds inside the cell