Effetto delle poliammine sulla regolazione della proteina cinasi C.

Effetto delle poliamine sulla regolazione della proteina cinasi C. Nel tentativo di contribuire al chiarimento del ruolo delle poliamine sui processi di fosforilazione intracellulari, in questa fase dell\u2019attivit\ue0 di ricerca abbiamo preso in esame gli effetti delle poliamine su diversi aspetti della regolazione della proteina cinasi C (PKC), serina/treonina cinasi che si presenta in diverse forme isoenzimatiche, alcune Ca++/diacilglicerolo (DAG)/fosfolipide dipendenti, ed altre con attivit\ue0 indipendente dal Ca++. Dal momento che l\u2019associazione della PKC alle membrane \ue8 il prerequisito essenziale per la risposta fisiologica dell\u2019enzima, particolare interesse \ue8 stato rivolto allo studio dell\u2019effetto delle poliamine sul processo di associazione della PKC alle membrane. A questo scopo abbiamo utilizzato un sistema sperimentale costituito da PKC parzialmente purificata da cervello di ratto e da liposomi, costituiti da fosfolipidi acidi, soprattutto acido fosfatidico (PA) e fosfatidilserina (PS). La PKC associata all membrane \ue8 stata saggiata quantitativamente come recettore degli esteri del forbolo cio\ue8 misurando il legame dell\u2019enzima attivato ad un estere del forbolo radioattivo (3H-PDBu) con cui l\u2019enzima interagisce con una stechiometria di 1:1. Esperimenti eseguiti con liposomi di composizione definita hanno permesso di stabilire che nelle condizioni in cui prevale la formazione del complesso caratterizzato da una stechiometria di legame di 3/4 molecole di PL acido/molecola di SPM si ha un\u2019inibizione nella formazione del complesso attivo. In questo caso infatti sembra che la SPM si disponga parallelamente alla superficie del liposoma impedendo l\u2019ulteriore legame dell\u2019enzima. Al contrario, nelle condizioni in cui prevale la formazione del complesso caratterizzato da una molecola di SPM/molecola di PS, la poliamina sembra legarsi perpendicolarmente alla superficie delle vescicole, e mediante i gruppi amminici non coinvolti nell\u2019interazione con i fosfolipidi legare i siti anionici dell\u2019enzima, favorendo l\u2019interazione della PKC con i liposomi