RABDOMIOSARCOMA: ESPRESSIONE E RUOLO DI BIN1

Il gene Bin1 d\ue0 origine a proteine derivanti da splicing alternativo che interagiscono con c-Myc ed hanno un ruolo di soppressori tumorali. Esse inibiscono la trasformazione cellulare Myc-mediata e promuovono l\u2019apoptosi in linee cellulari tumorali. Scopo di questo studio \ue8 la valutazione di espressione del trascritto Bin1 in biopsie di rabdomiosarcoma (RMS) rispetto al muscolo scheletrico fetale, di analizzarne l\u2019espressione sia a livello trascrizionale che proteico in linee cellulari di RMS e di esaminare il possibile ruolo di Bin1 nella biologia di questo tumore. Abbiamo valutato il livello di espressione di Bin1 mediante Sybr Green real time PCR in sei biopsie e successivamente in linee cellulari di RMS (RH30, RH4, RH28, RC2, RD, CCA, SMS). In quest\u2019ultime, trascritti contenenti l\u2019esone 10, caratteristico di isoforme muscolo-associate \ue8 stata analizzata mediante RT-PCR di una porzione centrale di Bin1. Inoltre mediante RT-PCR, PCR e sequenziamento dopo clonaggio si sono individuati i diversi trascritti in RC2, RH30 e RD. Lo studio dell\u2019espressione proteica di Bin1 \ue8 stato effettuato tramite tecniche di Western-blot e immunofluorescenza su preparati citologici. I risultati ottenuti tramite PCR quantitativa hanno confermato la sottoespressione di Bin1sia nelle biopsie che nelle linee cellulari di RMS. L\u2019espressione di trascritti caratterizzati dalla presenza dell\u2019esone 10 \ue8 stata rinvenuta in tutte le linee e tramite clonaggio e sequenziamento si \ue8 rilevata la presenza di sette diverse isoforme nelle 3 linee cellulari esaminate. Tra queste abbiamo identificato isoforme ubiquitarie e muscolo-associate, che da precedenti lavori sembrano caratterizzate da un\u2019attivit\ue0 anti-tumorale, trascritti derivanti da splicing aberrante e trascritti la cui funzione non \ue8 nota. Dati preliminari confermano la presenza delle isoforme proteiche ubiquitarie e muscolo-associate in tutte le 7 linee cellulari. Lo studio in immunofluorescenza di RD, RH30, RH4 dimostra la localizzazione prevalentemente nucleare di Bin1. In base a questi risultati intendiamo procedere alla trasfezione di alcune isoforme in cellule RH30 e RD per valutare il possibile ruolo anti-apoptotico di Bin1, di controllo del ciclo cellulare e/o differenziamento al fine di comprendere le conseguenze della sottoespressione di Bin1 nel RM