Demonstração de mitoses em precursores de mastócitos que repovoam o mesentério de rato

Orientadora: Prof.ª Dr.ª Maria Célia JamurDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Curso de Pós-Graduação em MorfologiaInclui referências: p. 37-44Área de concentração: Biologia CelularResumo: A injeção intraperitoneal de água destilada resulta na lise e desaparecimento dos mastócitos do mesentério. No presente estudo, investigamos o processo de proliferação dos mastócitos imaturos, durante o repovoamento do mesentério, 2 dias após a injeção de água destilada. Com objetivo de bloquear as células em mitose, a vimblastina foi injetada na cavidade peritoneal, 24 horas após a água destilada. A porcentagem de células em mitose foi determinada em fragmentos de mesentério corados com Giemsa. Nos fragmentos colhidos de animais que foram injetados com ambos, água destilada e vimblastina, 18,45% das células estavam em mitose. Quando os animais foram injetados apenas com água destilada, somente 0,46% das células estavam em mitose e nos fragmentos de animais injetados somente com vimblastina, foi observado que 2,64% das células estavam em mitose. Não foram observadas figuras mitóticas nos animais controles. O anticorpo monoclonal (mAb) BGD6 foi utilizado em associação com o corante nuclear Sytox Green, com a finalidade de confirmar se as células em mitose eram precursoras de mastócitos. Com esta técnica foi possível verificar que as células em mitose também foram imunomarcadas com o mAb BGD6. Com a varredura obtida pela microscopia confocal foi possível observar a marcação pontuada do mAb BGD6 distribuída na superfície celular dos mastócitos e os cromossomos localizados no interior da célula. Um outro efeito da vimblastina, foi a redução do número de mastócitos do mesentério. Nos animais controle, 4,27% das células dos fragmentos de mesentério foram identificadas como mastócitos, após a coloração com Giemsa. No entanto, houve um decréscimo na porcentagem de mastócitos maduros para 2.03%, após o tratamento com vimblastina. Estes resultados demonstram que os precursores de mastócitos proliferam no mesentério por divisão mitótica.Summary: In rats, intraperitoneal injection of distilled water results in the lysis and disappearance of mast cells from the mesentery. In the present study, the process of proliferation of immature mast cells during repopulation of the mesentery 2 days after injection of distilled water was investigated. Vinblastine was injected into the peritoneal cavity 24 hours after distilled water in order to block the cells in mitosis. The per cent of cells in mitosis was determined using Giemsa stained mesentery fragments. In fragments collected from animals injected with both distilled water and vinblastine, 18.45% of the cells were in mitosis. In contrast, only 0.46% of the cells were in mitosis when the animals were injected with distilled water alone and 2.64% of the cells were in mitosis in mesentery fragments from animals injected only with vinblastine. No mitotic figures were observed in control animals. In order to confirm that the mitotic cells were mast cell precursors the mast cell specific antibody, mAb BGD6 was used in combination with the nuclear stain Sytox Green. With this technique it was possible to verify that the cells immunostained with mAb BGD6 were indeed mitotic. With scanning confocal microscopy, the characteristic punctate staining of mAb BGD6 was observed on the surface of the mast cells with the chromosomes in the interior of the cell. Another effect of the vinblastine was a reduction in the number of mature mast cells in the mesentery. In control animals 4.27% of cells in the mesentery fragments were mast cells as identified by Giemsa staining. Following treatment with vinblastine, the per cent of mature mast cells fell to 2.03%. These results demonstrate that the mast cell precursors in the mesentery proliferate by mitotic division