Production and composition evaluation of extracellular vesicles by Candida haemulonii

Candida haemulonii é uma levedura emergente e multirresistente aos principais antifúngicos disponíveis. O sucesso da infecção está vinculado à liberação de moléculas ao ambiente extracelular, estabelecido por meio da secreção de vesículas extracelulares (VEs), as quais atravessam a parede celular fúngica para alcançar o espaço extracelular e mediar comunicação bidirecional com o hospedeiro. VEs fúngicas são compostas por diferentes biomoléculas e podem exercer papeis cruciais no processo fisiopatológico. Existem poucos estudos com C. haemulonii e, nesse sentido, caracterizar a produção e composição das VEs produzidas por C. haemulonii, bem como entender a função destas VEs, pode ser fundamental para o desenvolvimento de novas terapias antifúngicas. Assim, caracterizamos a produção de VEs por C. haemulonii por análise de rastreamento de nanopartículas (NTA), na concentração de 10^10, com tamanho variando de 25 a 400 nm e adicionalmente identificamos as dimensões dessas VEs por Microscopia Eletrônica de Transmissão. A composição das VEs obtidas foi identificada por análises de RNA-Seq e proteômica, revelando importantes moléculas no desenvolvimento da infecção. Adicionalmente, foi verificado o efeito de VEs de C. haemulonii na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) por macrófagos. Nossos dados sugerem que VEs produzidas por C. haemulonii podem diminuir a produção de EROs, auxiliando o fungo na sobrevivência e obtendo maior sucesso durante a infecção. Dessa forma, nossos resultados sugerem que VEs produzidas por C. haemulonii desempenham papel crucial na patogênese.Candida haemulonii is an emerging multidrug-resistant fungus. The infection success is dependent to releasing molecules to the extracellular environment, established by the extracellular vesicles (EVs) secretion, which cross the fungal cell wall to reach the extracellular space and mediates bidirectional communication with the host. Fungal EVs are composed from several biomolecules and can play crucial roles in the pathophysiological process. There are few studies with C. haemulonii. To characterize the production and composition of EVs from C. haemulonii, as well as to understand the EVs function must be critical to develop new antifungal therapies. Thus, we have characterized the production of VEs by C. haemulonii through nanoparticle tracking analysis (NTA), which shows size ranging from 25 to 400 nm. Furthermore, we have identified the EVs dimensions through Transmission Electron Microscopy. The EVs composition were identified by RNA-Seq and proteomic analysis, which identified important molecules related to the infection process. Moreover, we have verified the effect of C. haemulonii EVs on the reactive oxygen species (ROS) production by macrophages. Our data suggest that EVs produced by C. haemulonii can decrease the ROS production, affecting the fungal infection. Taken together, our results suggest that EVs produced by Candida haemulonii can plays a crucial role in pathogenesis