HPLC analysis of podophyllotoxin

Charles University, Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Analysis Candidate: Markéta Nováková Tutor: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Title of Thesis: HPLC Analysis of Podophyllotoxin The diploma thesis is focused on optimalization of HPLC method for the analysis of podophyllotoxin. The method was developed for the analysis of Juniperus virginiana leaves extract. Various stationary phases, mobile phases, temperatures, ultrasonic extraction times were tested. Following conditions were chosen as optimal: 30 minutes ultrasonic extraction time, LiChrospher 100 RP-18 250-4 column, 0,1% CH3COOH:ACN 45:55 mobile phase, temperature 40 řC, flow rate 0,8 ml/min, sample volume 3 μl, fluorescence detection λex 240 nm, λem 320 nm, time of analysis 9 minutes. The method was also developed for the analysis of plant tissue cultures of Juniperus virginiana, for which gradient elution was chosen. This method had following conditions: LiChrospher 100 RP-18 250-4 column, mobile phase 0,1% CH3COOH:ACN, change of acetic acid ratio: 0-8 min 70-10 %, 8-9 min 10 %, 9-10 min 10- 70 %, 10-12 min 70 %, temperature 40 řC, flow rate 0,8 ml/min, sample volume 3 μl, fluorescence detection λex 240 nm, λem 320 nm, time of analysis 12 minutes. Subsequently, both methods were...Univerzita Karlova, Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra: Katedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzy Kandidát: Markéta Nováková Školitel: PharmDr. Pavla Pilařová, Ph.D. Název diplomové práce: HPLC analýza podofylotoxinu Diplomová práce se zabývá optimalizací podmínek HPLC metody pro analýzu podofylotoxinu. Metoda byla vyvíjena pro analýzu extraktu z drogy z jalovce virginského (Juniperus virginiana L., var. Blue Arrow). Byly testovány různé stacionární fáze, mobilní fáze, teplota, doba extrakce pomocí ultrazvuku. Jako optimální byly vybrány tyto podmínky: doba extrakce drogy na ultrazvuku 30 minut, kolona LiChrospher 100 RP-18 250-4, mobilní fáze 0,1% CH3COOH:ACN v poměru 45:55, teplota 40 řC, průtok 0,8 ml/min, nástřik 3 μl, fluorimetrická detekce λex 240 nm, λem 320 nm, doba analýzy 9 minut. Metoda byla poté vyvíjena i pro extrakt z explantátové kultury jalovce virginského, pro který byla zvolena gradientová eluce. Tato metoda měla následující podmínky: kolona LiChrospher 100 RP-18 250-4, mobilní fáze 0,1% CH3COOH:ACN, změna poměru vodné složky: 0-8 min 70-10 %, 8-9 min 10 %, 9-10 min 10-70 %, 10-12 min 70 %, teplota 40 řC, průtok 0,8 ml/min, nástřik 3 μl, fluorimetrická detekce λex 240 nm, λem 320 nm, doba analýzy 12 minut. Obě metody byly následně validovány. Hodnocenými...Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical AnalysisKatedra farmaceutické chemie a farmaceutické analýzyFarmaceutická fakulta v Hradci KrálovéFaculty of Pharmacy in Hradec Králov