Targeting DNA damage response with nanobodies

H2AX est un variant de l’histone H2A, phosphorylé lors du stress réplicatif par les kinases ATR, ATM et DNA-PK. Mon travail de thèse a porté sur l’étude de la forme phosphorylée de H2AX (γ-H2AX) en réponse au stress réplicatif induit par des molécules génotoxiques. Les résultats obtenus au cours de ce travail ont montré que l’extension de la phosphorylation de H2AX à l’ensemble du noyau est un indicateur du stress réplicatif létal. Ce travail de thèse a également permis le développement d’un VHH, fragment d’anticorps à chaînes lourdes présents chez les camélidés, reconnaissant γ-H2AX. Pour analyser γ-H2AX dans les cellules vivantes, une stratégie optogénétique d’export nucléaire des VHHs a été développée dans le cadre d’une collaboration. Enfin, ce VHH a été utilisé pour développer une méthodologie de criblage de produits génotoxiques en une étape. Les résultats obtenus avec ce réactif recombinant confirment l’utilisation possible de VHHs comme alternative aux anticorps monoclonaux traditionnellement utilisés pour la détection des modifications post traductionnelles.H2AX, a variant of the H2A histone is phosphorylated by the kinases ATR, ATM and DNAPK following replication stress. My thesis was focused on the study of the phosphorylated form of H2AX (γ-H2AX) during replication stress. The results obtained showed that pan-nuclear H2AX phosphorylation was an indicator of lethal replication stress. This thesis allowed the development of a VHH, the recognition domain of heavy chain antibodies from camelids, directed against γ-H2AX. To analyze γ-H2AX in live cells, an optogenetic nuclear export strategy was developed as part of a collaboration. Furthermore, this VHH was used to develop a one-step genotoxicity screening strategy. The results obtained confirm the use of VHHs to detect post-translational modifications as an alternative to monoclonal antibodies