Doença hepática gordurosa não alcoólica : implicações fisiopatológicas da senescência celular e desafios diagnósticos e terapêuticos

Tese (Doutorado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Da Saúde, 2022.Introdução: A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é um grande termo que envolve desde a simples deposição de tecido adiposo no fígado a um progressivo processo de esteatose hepática associado a hepatite, fibrose, cirrose e, em alguns casos, carcinoma hepatocelular cuja prevalência da DHGNA encontra-se em torno de 20-30% em países do Ocidente (alguns estudos relatam até 40-50%) e 5-18% em países asiáticos. Objetivos: avaliação de fatores clínicos e metabólicos associados ao conteúdo hepático de gordura determinado por ressonância magnética, correlação de concentrações séricas de IGF-1 e comprimento de telômeros de leucócitos com fração hepática de gordura e avaliação da efetividade de dapagliflozina e comprimento de telômeros em um ensaio clínico piloto em sujeitos com DHGNA com e sem DM2. Materiais e Métodos: Realizamos o estudo em duas partes: 1) estudo transversal para avaliação de fatores associados à fração hepática de gordura 2) ensaio clínico piloto com dapagliflozina controlado por placebo por 12 meses com avaliação de comprimento de telômeros de leucócitos. A avaliação bioquímica incluiu concentrações séricas de glicose, hemoglobina glicada, lipoproteínas, AST, ALT, gama-glutamil transferase, ferritina, saturação de transferrina, tireotropina. Testes sorológicos para exclusão de infecção pelos vírus da hepatite B e C também foram realizados. As concentrações séricas de insulina no plasma em jejum foram realizadas para participantes com tolerância normal à glicose. As concentrações séricas basais de IGF1 foram determinadas pelo método quimioluminescência. Todos os participantes foram submetidos à ressonância magnética usando um scanner de corpo inteiro de 1,5 T (Philips Multiva). O comprimento relativo dos telômeros dos leucócitos foi medido pela reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qPCR). Resultados: No estudo transversal, foram incluídos 47 indivíduos com DHGNA e treze (27,7%) participantes tinham o diagnóstico de diabetes mellitus tipo 2. Examinamos a associação entre as variáveis clínicas e bioquímicas e a FHG determinada por ressonância magnética agrupando os sujeitos do estudo em dois grupos, de acordo com a fração hepática de gordura abaixo ou acima da mediana da fração hepática de gordura (15,9%). As concentrações séricas de triglicerídeos séricos foram significativamente maiores entre os indivíduos com fração hepática de gordura acima da mediana. A análise de subgrupo entre os sexos indicou que as concentrações séricas de insulina no plasma em jejum e HOMA-IR foram positiva e moderadamente correlacionados com a fração hepática de gordura em homens, mas não em mulheres, entre os participantes com tolerância normal à glicose. As concentrações séricas de glicose em jejum foram moderadas e significativamente correlacionadas com a fração hepática de gordura em mulheres, mas não em homens. Para a avaliação de comprimento de telômeros de leucócitos, foram incluídos 32 indivíduos com DHGNA. A mediana de idade foi de 40 (34,5-56,7) anos, sendo a maioria homens (20; 62,5%). Examinamos a associação entre variáveis clínicas e bioquímicas e comprimento relativo de telômeros comparando indivíduos com comprimento relativo de telômeros abaixo e acima da mediana (0,64). Indivíduos com comprimento relativo de telômeros abaixo da mediana tinham idade significativamente maior, IMC menor, concentrações séricas de AST e GGT mais altas, concentrações séricas de ferritina mais baixas e maior pontuação no escore FIB4, quando comparados com aqueles que apresentaram comprimento relativo de telômeros acima da mediana. Um modelo de regressão logística multivariável considerando comprimento relativo de telômeros abaixo ou acima da mediana como variável dependente e idade, IMC, AST e GGT ferritina séricas e pontuação FIB4 como variáveis independentes indicaram que apenas a idade estava significativamente associada comprimento relativo de telômeros. Para o ensaio clínico piloto, acompanhamos por 12 meses, 18 pacientes, 12 pacientes no grupo tratamento e 6 pacientes no grupo placebo. Não houve diferença entre o grupo tratamento e placebo quanto à redução igual ou superior a 30% da fração hepática de gordura e normalização da AST, ALT e GGT. A correlação de Spearman para o grupo tratamento mostrou correlação moderada com circunferência abdominal, AST, ALT, GGT na avaliação final. Avaliamos o comprimento de telômeros de leucócitos em 9 pacientes (7 pacientes do grupo tratamento 2 pacientes do grupo placebo) antes e após o tratamento e não houve alteração em comprimento relativo de telômeros nos 12 meses de seguimento. Conclusão: nossos dados sugerem que as concentrações séricas de triglicerídeos séricos podem estar associadas ao conteúdo de gordura hepática medido por ressonância magnética em adultos com sobrepeso / obesidade com DHGNA, embora outras anormalidades metabólicas clínicas e bioquímicas relacionadas à resistência à insulina não tenham sido capazes de predizê-lo. As concentrações séricas de IGF-1 não se correlacionaram com a gordura hepática, possivelmente por nossa amostra ser constituída de pacientes de baixo risco para fibrose. Os ISGLT2 devem ser mais bem estudados para o tratamento de pacientes com DHGNA sem DM2. No que se refere à senescência celular, nossos achados reiteram que a idade é o fator mais importante associado ao comprimento dos telômeros e a obesidade por si só não prediz CTL mais curto. Maiores concentrações séricas de AST, GGT e maior pontuação no escore FIB4 foram associadas ao menor comprimento dos telômeros, e este é um ponto que deve ser estudado.Introduction: Non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a term that ranges from the simple deposition of fatty tissue in the liver to a progressive process of hepatic steatosis associated with hepatitis, fibrosis, cirrhosis and, in some cases, hepatocellular carcinoma. The prevalence of NAFLD is around 20-30% in Western countries (some studies report up to 40-50%) and 5-18% in Asian countries. Objectives: evaluation of clinical and metabolic factors associated with liver fat content determined by MRI, correlation of serum IGF-1 concentrations and leukocyte telomere length with liver fat fraction by MRI, and assessment of the effectiveness of dapagliflozin and telomere length in a pilot clinical trial in NAFLD subjects with and without T2DM. Materials and Methods The study was carried out in two parts: 1) cross-sectional study to assess predictors of hepatic fat assessment 2) 12-month placebocontrolled clinical trial with dapagliflozin for NAFLD and assessment of leukocyte telomere length. Biochemical evaluation includes glucose, ALT, AST, glycated hemoglobin, lipoproteins, gamma-glutamyl transferase, ferritin, saturation, thyrotropin. Serological tests to exclude hepatitis B virus infection and were also performed. Plasma insulin levels were performed in subjects with normal glucose tolerance. Basal serum IGF1 were made by the chemiluminescent method. All participants were picked by all magnetic shield bodies of a 1.5 T scanner (Philips Multiva). of leukocyte telomeres was measured by the real-time polymer chain reaction (qPCR). Results: In the cross-sectional study 47 individuals, 13 with the diagnosis of diabetes mellitus and NAFLD were included (27.7%). We evaluated in two groups, according to the hepatic fat fraction, below or above the median value of the hepatic fat fraction (15.9 %). Serum triglycerides were significantly higher among subjects with hepatic fat fraction above the median. Subgroup analysis based on gender indicated that women with fasting plasma insulin and HOMAIR were moderately positive correlated to hepatic fat fraction in men, but not in women, among patients with normal glucose tolerance. Fasting serum glucose concentrations were moderately and significantly correlated with hepatic fat fraction in women, but not in men. In the assessment of leukocyte telomere length, 32 subjects with NAFLD were included. The median age was 40 (34.5-56.7) years, with the majority being men (20; 62.5%). We examined the associations between clinical and biochemical variables and telomere length comparing two groups of telomere length, below and above the median (0.64). Subjects with telomere length below the median had significantly older age, lower BMI, higher serum AST and GGT and higher FIB4 score, compared to those with telomere length above the median. A multivariable logistic regression model considering telomere length as a dependent variable and age, BMI, AST, GGT FIB4 as independent variables, indicated that only age was significantly associated with telomere length. In the pilot clinical trial, we followed for 12 months, 18 patients, 12 patients in the treatment group and 6 patients in the placebo group. There was no difference between the group and the treatment in the reduction or 30% reduction of the hepatic fat fraction in the group of dapagliflozin compared to the placebo as well as there is no difference in the normalization AST, ALT, GGT. Spearman’s correlation for the treatment group showed moderate correlation with waist circumference, AST, ALT and GGT in the final evaluation. We evaluated leukocyte telomere length in 9 patients (7 patients in the treatment group 2 patients in the placebo group) before and after treatment and there was no change in the 12 months of treatment. Conclusion: our data suggest that serum triglyceride concentrations may be associated with hepatic fat content as measured by MRI in overweight/obese adults with NAFLD, although other clinical and biochemical metabolic abnormalities related to insulin resistance were not able to predict it. Serum IGF1 concentrations did not correlate with liver fat, possibly because our sample consisted of patients at low risk for fibrosis. ISGLT2 should be further studied for the treatment of NAFLD patients without T2DM. About cellular senescence, our findings reiterate that age is the most important factor associated with telomere length and obesity alone does not predict shorter leukocyte telomere length. Higher serum concentrations of AST, GGT and higher FIB-4 score were associated with shorter telomere length, and this is a point that should be studied