Identificação de bacteriófagos com potencial no controlo da tuberculose da oliveira

Mestrado de dupla diplomação com a UTFPR - Universidade Tecnológica Federal do ParanáPseudomonas savastanoi pv. savastanoi (Pss) é a bactéria patogénica causal da doença tuberculose-da-oliveira, sendo uma das principais responsáveis pelas perdas significativas na produção e qualidade do olival em todo o mundo especialmente em países do Mediterrâneo. O seu ataque na oliveira ocorre na parte aérea, formando nódulos visíveis no tronco, caule, folhas e frutos, não existindo um tratamento específico e eficaz quando estabelecida no olival. Ocasionando a necessidade no desenvolvimento de ferramentas inovadoras, seguras e eficazes para o seu controlo. Assim, neste trabalho pretendeu-se identificar bacteriófagos com potencial de serem usados contra a tuberculose. Devido à elevada especificidade dos fagos, procedeu-se numa primeira fase ao estudo da comunidade bacteriana endofítica associada a tumores e a ramos de oliveira sem sintomas com o intuito de constituir uma coleção de estirpes de Pss que será útil no processo de seleção de bacteriófagos. O isolamento em cultura seguida pela identificação dos isolados bacterianos através da sequenciação da região 16S do rDNA permitiu identificar um total de 69 taxa, sendo Pantoea e Erwinia os géneros mais abundantes em caules assintomáticos, tendo destaque nos sintomáticos os géneros Pantoea e Curtobacterium. O método por maceração gerou uma maior diversidade taxonómica que no método de explante, sendo nos caules sintomáticos que verificou maior diversidade e abundância bacteriana relativamente aos caules assintomáticos. O isolamento de bacteriófagos em amostras de solo de olival permitiu identificar, pela primeira vez, um total de nove bacteriófagos com capacidade de causar a lise de Pss. A sua ação na luta contra a tuberculose deverá ser avaliada no futuro com ensaios in planta. Quando avaliada a eficiência dos bacteriófagos contra a Pss em fatias de cenoura biológica, não se obteve diferenças significativas, no entanto os resultados obtidos sugerem que os bacteriófagos podem ser considerados possíveis agentes de biocontrolo contra a multiplicação do patógeno, necessitando, porém, de estudos complementares.Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi (Pss) is a pathogenic bacterium that causes olive knot, being one of the main responsible for the significant loss in the production and quality of olive groves worldwide, especially in Mediterranean countries. The attack on the olive tree occurs in the aerial part, forming visible nodules on the trunk, stem, leaves and fruits, and there is no specific and effective treatment when established in the olive grove. Causing the development of innovative, safe and effective tools for its control. Thus, this work aimed to identify bacteriophages with the potential to be used against tuberculosis. Due to the high specificity of the phages, the study of the endophytic bacterial community associated with tumors and symptomless olive branches was carried out in a first phase, with the aim of constituting a collection of Pss strains that will be useful in the bacteriophage selection process. The isolation in culture followed by the identification of bacterial isolates through the sequencing of the 16S region of the rDNA allowed the identification of a total of 69 taxa, with Pantoea and Erwinia being the most abundant genera in asymptomatic stems, with emphasis on the symptomatic genera Pantoea and Curtobacterium. The maceration method generated a greater taxonomic diversity than the explant method, and the symptomatic stems showed greater bacterial diversity and abundance than the asymptomatic stems. The isolation of bacteriophages in olive grove soil samples allowed the identification, for the first time, of a total of nine bacteriophages capable of causing Pss lysis. Its action in the fight against tuberculosis should be evaluated in the future with in plant test. When evaluating the efficiency of bacteriophages against Pss in slices of biological carrot, no significant differences were obtained, however the results obtained suggest that bacteriophages can be considered possible biocontrol agents against the multiplication of the pathogen, requiring, however, additional studies.Este trabalho é financiado por fundos FEDER através do programa COMPETE (Programa Operacional Fatores de Competitividade), por fundos nacionais através da FCT – Fundação para a Ciência e a Tecnologia, e Europeus (Horizon 2020) através do projeto PRIMA/0002/2018 (INTOMED - Innovative tools to combat crop pests in the Mediterranean)