Nová definice objemu stacionární fáze ve smíšených chromatografických kolonách použitelných v hydrofilní kapalinové chromatografii

Polar columns used in the HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) systems take up water from the mixed aqueous-organic mobile phases in excess of the water concentration in the bulk mobile phase. The adsorbed water forms a diffuse layer, which becomes a part of the HILIC stationary phase and plays dominant role in the retention of polar compounds. It is difficult to fix the exact boundary between the diffuse stationary and the bulk mobile phase, hence determining the column hold-up volume is subject to errors. Adopting a convention that presumes that the volume of the adsorbed water can be understood as the column stationary phase volume enables unambiguous determination of the volumes of the stationary and of the mobile phases in the column, which is necessary for obtaining thermodynamically correct chromatographic data in HILIC systems. The volume of the aqueous stationary phase, Vex, can be determined experimentally by frontal analysis combined with Karl Fischer titration method, yielding isotherms of water adsorbed on polar columns, which allow direct prediction of the effects of the composition of aqueous-organic mobile phase on the retention in HILIC systems, and more accurate determination of phase volumes in columns and consistent retention data for any mobile phase composition. The n phase volume ratios of 18 columns calculated according to the new phase convention strongly depend on the type of the polar column. Zwitterionic and TSK gel amide and amine columns show especially strong water adsorption.Polární kolony používané v systémech HILIC (chromatografie hydrofilních interakcí) váží vodu ze smíšených vodně-organických mobilních fází ve větším množství, než je koncentrace vody v mobilní fázi. Adsorbovaná voda tvoří difuzní vrstvu, která se stává součástí HILIC stacionární fáze a hraje dominantní roli při retenci polárních sloučenin. Je obtížné stanovit přesnou hranici mezi difuzní stacionární a objemovou mobilní fází, proto je stanovení zadrženého objemu vody v koloně vystaveno chybám. Přijetí konvence, která předpokládá, že objem adsorbované vody lze chápat jako objem stacionární fáze kolony, umožňuje jednoznačné stanovení objemů stacionární a mobilní fáze v koloně, což je nezbytné pro získání termodynamicky správných chromatografických dat v HILIC. systémy