Diseño de un plásmido capaz de expresar la β-fructosidasa (invertasa) en una biofábrica de origen bacteriano

La tecnología del ADN recombinante ha permitido desarrollar la capacidad de clonar y expresar en un hospedero un gen ajeno a él, con la finalidad de aumentar la producción de proteínas recombinantes a un menor costo. En los últimos años, las aplicaciones de las enzimas tipo invertasas han sido exploradas en el sector farmacéutico, alimentario e incluso, agropecuario, debido a su capacidad de catalizar la hidrólisis de sacarosa para la síntesis de oligosacáridos. En la presente investigación se diseñó un plásmido capaz de expresar β-fructosidasa (BfrA) del microorganismo extremófilo Thermotoga marítima, proponiendo a Escherichia coli M15 como biofábrica para la expresión y producción de BfrA en la industria de fructooligosacáridos. El diseño del vector consideró la necesidad de una resistencia a antibióticos para las células transformadas, proponiendo el uso de cloranfenicol y ampicilina. Así como la inclusión de una cola de histidinas, que facilite la purificación de la proteína BfrA sintetizada por E. coli M15 mediante cromatografía de afinidad con un metal inmovilizado (IMAC). El vector seleccionado tiene un sitio de clonación múltiple para facilitar la ligación del gen bfrA y el gen reportero gfp como indicador del éxito de la ligación y la síntesis in vivo de la proteína BfrA. El plásmido propuesto ofrece la ventaja de tener una inducción controlada por lactosa pudiendo ser expresado en una bacteria de fácil y rápido crecimiento, lo que representará un menor costo en la síntesis de BfrA a nivel industrial, teniendo la oportunidad de aprovechar al máximo su uso en la producción, por ejemplo, de jarabes de azúcar con alto contenido de fructosa y fructoligosacáridos con propiedades medicinales para personas con diabetes