Produção de ß-galactosidase a partir de bactéria isolada do soro de queijo

Orientador: Profª. Dra. Raquel StröherMonografia (graduação) - Universidade Federal do Paraná, Setor Palotina,Curso de Graduação em Engenharia de Bioprocessos e BiotecnologiaInclui referências: p. 50-55Resumo: o soro de queijo é um subproduto das indústrias de laticínios e em sua composição há grande parte da lactose contida no leite. Uma das alternativas de aproveitamento do soro que vem sendo estudada é sua utilização como substrato para produção de enzimas, pois apresenta benefícios econômicos e ambientais. A enzima responsável por hidrolisar a lactose é a ß-galactosidase, também conhecida como lactase. A fonte para produção da lactase pode ser de origem animal, microbiana ou vegetal, sendo que aquela extraída de fontes bacterianas tem apresentado diversas vantagens, como alta atividade, facilidade de fermentação e estabilidade. As bactérias que produzem lactase podem ser encontradas no soro de queijo, devido à quantidade de lactose presente. O objetivo do presente trabalho foi isolar uma bactéria produtora de lactase do soro de queijo e analisar a influência de diferentes temperaturas e concentrações de lactose na atividade dessa enzima. Para isso, a seleção dos microrganismos foi realizada utilizando-se a técnica de diluição em série de amostras do soro de queijo em água destilada e o microrganismo foi repicado em placas de petri contendo meio MRS (seletivo para Lactobacillus). Para avaliação da produção de enzima, foi realizado um planejamento experimental do tipo fatorial completo 22 com quadruplicata no ponto central, tendo como variáveis a temperatura (30, 37 e 43 ºC) e a concentração de lactose adicionada ao meio (0, 35 e 70 g L-1 ); os frascos ficaram sob agitação a 150 rpm e as amostras eram retiradas para análise após 24, 48 e 72 h. Com o objetivo de extrair a enzima, o método utilizado foi agitação em vórtex com pérolas de vidro. A atividade enzimática foi quantificada através dos métodos ONPG e Lane-Eynon. A variável que apresentou maior efeito significativo foi a temperatura, cujos valores mais elevados alcançaram melhores resultados. O ensaio que apresentou maior atividade enzimática foi utilizando-se 0 g L-1 de lactose, a 43 ºC, após 24 h de reação, alcançando o valor de 1,97 U mL-1 . O método Lane-Eynon também evidenciou a importância que a temperatura exerce na atividade da enzima. Dessa forma, foi possível realizar o isolamento de microrganismo produtor da enzima lactase do soro de queijo e avaliar a influência da temperatura e concentração de lactose na atividade da mesma