Caracterização química, composição nutricional, propriedades antioxidantes, atividades hemolítica, alelopática, antagonista, antitumoral e imunosupressora de Armillaria sp. (Physalacriaceae)

Orientadora: Prof.ª Dra Marilis Dallarmi MiguelCoorientadores: Prof. Dr. Celso Garcia Auer, Prof. Dr. Obdulio Gomes MiguelTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa : Curitiba, 29/03/2019Inclui referências: p.125-154Resumo: Armillaria é um fungo fitopatogênico que ataca diversas plantas principalmente as lenhosas. Espécies desse gênero são utilizadas na alimentação e produção de medicamentos. Este estudo teve como objetivo investigar a composição química e avaliar as atividades biológicas e antioxidante dos extratos de micélio e caldo de cultivo de uma espécie de Armillaria. O micélio foi cultivado em caldo batata dextrose por 35 dias a 20 °C no escuro. O micélio foi liofilizado, o caldo de cultivo concentrado em estufa, e submetidos a extração por Soxhlet separadamente. Verificou-se a composição nutricionais do micélio. Os extratos foram submetidos a análise química preliminar. O extrato hexânico (EH) analisado por ressonância magnética nuclear e cromatografia gasosa acoplado a espectrometria de massas. Cristal isolado do extrato acetato de etila do micélio (EAEM) foi analisado por cristalografia de Raio X. A fração polissacarídica (P1) foi extraída do micélio e caracterizada por ressonância magnética nuclear, cromatografia e análises colorimétricas. Os extratos foram submetidos a ensaios de doseamento de fenóis totais pelo método de Folin Ciocalteou; atividades antioxidantes pelos métodos de DPPH, fosfomolibdênio, Azul da Prússia e TBARS; avaliação da toxicidade frente Artemia salina; atividade hemolítica; alelopática; e antimicrobiana. Os extratos e P1 foram submetidos a atividade antitumoral e imunomoduladora. Os micélios de fungos fitopatogênicos foram submetidos a análise antagonista. O micélio de Armillaria sp. apresentou: umidade 18,9%; proteína 6,1%; lipídeos 3,2%; carboidratos 55,5%; fibras brutas 16,3%; teor de quitina 7,6%. Os extratos apresentam compostos fenólicos, esteroides e terpenos. No EH foi identificado ácido benzoico, ácido láurico e ácido palmítico e no EAEM D-Treitol. No P1 foi identificado a fucogalactana, com presença de galactose (44,1%), glicose (30,7%), manose (17,5%), fucose (8,1%) e apresentou compostos fenólicos (47,1 mg.EAG.g-1) e carboidratos (90,38%). O extrato acetato de etila do caldo de cultivo (EAEC) apresentou maior concentração de compostos fenólicos (132,2 mg.EAG.g-1). Os extratos apresentaram redução do complexo fosfomolibdênio, atividade oxirredutora e redução da peroxidação lipídica, mas a redutora de radical livre foi observada somente no EAEC. Não foi observada toxicidade frente a A. salina. A atividade hemolítica foi observada no extrato bruto (EB) (500 Mig.mL-1) e EH (200, 500 e 1000 ?g.mL-1). No ensaio alelopático o EB estimulou a germinação das sementes de L. sativa e o EAEC estimulou a germinação das sementes de A. cepa. O crescimento da radícula e do hipocótilo foi influenciado em diferentes tratamentos. Observou-se atividade antimicrobiana do EB (250 ?g.mL-1) frente Candida parapsilosis, EH (150 Mig.mL-1) e extrato clorofórmico (250 Mig.mL-1) contra Enterococcus faecalis e EAEC (500 Mig.mL-1) contra Escherichia coli. Todos os extratos apresentaram atividade antitumoral contra células da linhagem H295R. A maioria dos extratos apresentaram ação imunossupressora, porém o efeito imunoestimulante foi observado pela P1 e EC. Os fungos apresentaram diferentes índices antagonistas, com destaque para o Diplodia pinea e Botrytis cinerea. Os resultados obtidos neste trabalho podem contribuir para a caracterização do gênero Armillaria.Abstract: Armillaria is a phytopathogenic fungus that attacks several plants, mainly the woody plants. Species of this genus are used as food and production of medicines. This study aimed to investigate the chemical composition and to evaluate the biological and antioxidant activities of the mycelium and culture medium extracts from one Armillaria species. The mycelium was cultivated in potato dextrose medium for 35 days at 20 °C in the dark. The mycelium was lyophilized, and the culture medium concentrated in incubator, and submitted to extraction in Soxhlet separately. It was found the nutritional composition of the mycelium. The extracts were submitted to preliminary chemical analysis. The hexane extract (EH) evaluated using nuclear magnetic resonance and gas chromatography coupled to mass spectrometry. Isolated crystal of the ethyl acetate extract of the mycelium (EAEM) was evaluated by X-ray crystallography. The polysaccharidic fraction (P1) was extracted of the mycelium and characterized using nuclear magnetic resonance, chromatography and colorimetric analyses. The extracts were submitted to total phenol assays by Folin Ciocalteou method; antioxidant activities by the DPPH, phosphomolibdemium, Prussian Blue and TBARS methods; evaluation of the toxicity front Artemia salina; hemolytic activity; allelopathic; and antimicrobial. The extracts and P1 were submitted to the antitumoral and immunomodulatory activity. The mycelium of these phytopathogenic fungi were submitted to antagonist analysis. The mycelium from Armillaria sp. showed: moisture 18.9%; protein 6.1%; lipids 3.2%; carbohydrates 55.5%; crude fibers 16.3%; chitin content 7.6%. The extracts showed phenolic compounds, steroids and terpenes. In the EH was identified the benzoic acid, lauric acid and palmitic acid and in the EAEM D-Treitol. In the P1 was identified the fucogalactane, with the presence of galactose (44.1%), glycose (30.7%), mannose (17.5%), fucose (8.1%) and showed phenolic compounds (47,1 mg.EAG.g-1) and carbohydrates (90.38%). The ethyl acetate extract of the culture medium (EAEC) showed large concentration of phenolic compounds (132,2 mg.EAG.g-1). The extracts showed reduction of the complex phosphomolibdemium, oxireduct activity and reduction of the lipid peroxidation but the reduction activity was observed only in the EAEC. It was not observed toxicity front A. salina. The hemolytic activity was observed in the brute extract (EB) (500 Mig mL-1) and EH (200, 500, and 1000 Mig mL-1). In the allelopathic assay the EB stimulated the germination of L. sativa seeds and the EAEC stimulated the germination of the A. cepa seeds. The growth of radicle and the hypocotyl was influenced in different treatments. It was observed antimicrobial activity of the EB (250 Mig mL-1) front Candida parapsilosis, EH (150 Mig mL-1) and chloroform extract (250 Mig mL-1) against Enterococcus faecalis and EAEC (500 Mig mL-1) against Escherichia coli. All the extracts showed antitumor activity against cells of the H295R lineage. Most of the extracts showed immunosuppressor action, however the immunostimulant effect was observed by the P1 and EC. The fungi showed different antagonist index, with spotlight for the Diplodia pinea and Botrytis cinerea. The results obtained in this study can contributed for the characterization of the Armillaria genus