SEPARAÇÃO DE PIGMENTOS FOTOSSINTÉTICOS DO FITOPLÂNCTON POR MEIO DE CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA (CLAE)

One of the most important index in oceanography, phytoplankton biomass, is based on determination of chlorophyll a, an algae pigment. Unlike higher plants, algae show in their composition a large number of pigments broadly called accessory or photosynthetic pigments. These pigments include chlorophylls, carotenoids and phycobiliproteins. Measuring the relative or absolute concentration of algae pigments is a powerful tool to study algae phylogeny, taxonomy, physiology, ecology and others. Chlorophyll a concentration is determined in natural samples either by spectroscopy or fluorometry. In the other hand, the determination of other photosynthetic pigments, such as carotenoids, is difficult due to their close absorption characteristic and the absence of fluorescence. In the last few years, with new materials and technologies development, chromatographic methods, specially high performance liquid chromatography (HPLC), have been successfully applied to quantify chlorophylls and carotenoids in natural waters. These new meth¬odologies opened a new perspective on measuring algae pigments, either by improving the determination of chlorophyll a precision or by making possible to measure up to 50 pigments, including some degradation products. In this paper, a procedure to qualitatively calibrate an HPLC system is presented. Nineteen pigments, from six species, representing different algae groups (dinoflagellates, green algae, cryptomonads, prymnesiophytes, diatoms and cyanophytes) were separated and identified by their retention times and spectral characteristics. The method application is exemplified in 3 natural samples.Pigmentos de algas são utilizados amplamente em oceanografia sendo que um dos mais importantes índices, o da biomassa do fitoplâncton, baseia-se na determinação da clorofila a (cia a). Diferente de vegetais superiores, uma das características das algas do plancton é a existência de uma grande diversidade de pigmentos, chamados acessórios ou fotossintéticos, que estão distribuídos entre as diferentes classes. Estes pigmentos incluem clorofilas, carotenóides e ficobiliproteínas. O valor destes pigmentos como ferramenta para estudos filogenéticos, taxonômi¬cos, fisiológicos, ecológicos e outros é grande. Embora a determinação de cla a seja relativamente fácil, a determinação de carotenôides é complexa, dado que estes tem seus máximos de absorção próximos, em torno de 450 nm, e por não possuirem fluorescência. Porém, nos últimos anos, com desenvolvimento de novos materiais e métodos, a técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) tem sido utilizada amplamente para a determinação de pigmentos fotossintéticos em oceanografia. No presente trabalho, são apresentados resultados da separação por CLAE de pigmentos fotossintéticos de 6 representantes de grupos diferentes de algas (dinoflagelados, algas verdes, criptomônadas, primnesiofitas, diatomáceas, e cianof ítas). Os pigmentos foram identifi¬cados por meio de seu tempo de retenção e de suas caraterísticas espectrais, em comparação com a composição de pigmentos de algas documentada na literatura. Um total de 19 pigmentos foram identificados. A aplicação da técnica é demonstrada na análise de 3 amostras naturais