Caracterização química e avaliação das atividades antioxidante, anti-tumoral, anti-inflamatória e antimicrobiana dos extratos de folhas e flores de Eupatorium inulaefolium

Eupatorium inulaefolium (Kunth) R. M. King & H. Rob., popularly known as “cambará de bicho”, “cambará” or “circuta galega ” is a native and not endemic plant species in Brazil and traditionally used in the treatment of throat diseases, anemia, tuberculosis and ocular inflammation. Despite its popular use, few studies have been carried out to evaluate its biological activities as well as to confirm its constituents.The present study aimed to chemically characterize and investigate the antioxidant,antitumor.The present study aimed to chemically characterize and investigate the antioxidant, antiinflammatory and antimicrobial potentials in vitro extracts of hexane (EHFA, EHFR), ethyl acetate (EAFA, EAFR) and methanol (EMFA, EMFR) from its leaves and flowers. The antioxidant activity was evaluated by Radical Sequestration DPPH, Phosphomolybdenum and Co-oxidation assay of the β-carotene / linoleic acid. Cultures of J774A.1 cells were used to assess cytotoxicity (MTT test) and antiinflammatory activity (nitrite assay - Griess reaction). In vitro antimicrobial activity was investigated by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) using broth microdilution using different strains of fungi and bacteria. In addition, the quantitative evaluation can be done through the parameters of total activity, percentage of activity and index of susceptibility. Phenol and flavonoid were determined by colorimetric and/or turbidimetric methods. The chemical characterization was performed with gas chromatography coupled to the mass spectrometer (CG-EM) and ultra-efficient liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UFLC-QTOF-MS). The EMFA and EMFR extracts presented 50% Effective Concentration (IC50) ranged from 11,30 and 12,70 μg/mL, respectively, by DPPH assay. In phosphomolybdenum, EMFA presented 134,23% regarding rutin and 111,19% regarding quercetin. Also, in β-carotene / linoleic acid, EMFR presented Lipid Peroxidation Inhibition (I%) 55,58%. Besides, in vitro tests revealed that, at the tested concentrations (between 100 and 6,25 µg / mL), no extract reduced the viability of J774A.1 cells to levels below 70%, following ISO10993-5: 2009. Regarding anti-inflammatory activity, EAFA extracts (100 µg / mL) and EAFR (all concentrations) were more expressive, significantly reducing the production of nitric oxide. The extracts showed promising antimicrobial activity concerning the tested strains. About the total phenol and flavonoid contents the extracts EMFA and EMFR presented 109,50 and 142,55 μg / mg and 93,04 and 102,88 μg / mg respectively. The EHFA and EHFR extracts, triterpenes derived from alpha and beta amirine acetate and taraxasterol acetate were isolated and identified. While, in the extracts EAFA, EAFR, EMFA and EMFR the following substances 6-methoxyikaempferol were identified; methoxylated tetrahydroxyflavone; trihydroxy-tetramethoxy flavone; eupatorine and himenoxin.To sum up, we can suggest that E. inulaefolium has the potential for antioxidant, antifungal and anti-inflammatory activities. Further studies should be carried out to confirm its therapeutic importance, and to relate it to the phytochemicals present in the species.Eupatorium inulaefolium (Kunth) R. M. King & H. Rob., popularmente conhecida como “cambará de bicho”, “cambará” ou “circuta galega” é uma espécie vegetal nativa e não endêmica do Brasil, tradicionalmente utilizada no tratamento de doenças de garganta, anemia, tuberculose e inflamações oculares. Apesar de seu uso popular, poucos estudos foram realizados para avaliar suas atividades biológicas bem como para confirmar seus constituintes. Assim, o presente estudo teve como objetivo investigar os potenciais antioxidante, anti-inflamatório e antimicrobiano in vitro e caracterizar quimicamente os extratos em hexano (EHFA, EHFR), em acetato de etila (EAFA, EAFR) e em metanol (EMFA, EMFR) das folhas e flores dessa espécie. A atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos de Sequestro do Radical DPPH, Fosfomolibdênio e ensaio de Co-oxidação do Sistema β-caroteno/ácido linoleico. Culturas de células J774A.1 foram utilizadas para avaliar a citotoxicidade (teste de MTT) e a atividade anti-inflamatória (Reação de Griess). A atividade antimicrobiana foi investigada por meio da determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) através do método de microdiluição em caldo, utilizando diferentes cepas de fungos e bactérias. Também foi realizada uma avaliação quantitativa dessa atividade pelos parâmetros de atividade total, percentual de atividade e índice de susceptibilidade. Os teores de fenois e flavonoides foram determinados por métodos colorimétricos e/ou turbidimétrico. A caracterização química foi realizada com a cromatografia de fase gasosa acoplada ao espectrômetro de massas (CG-EM) e cromatografia líquida ultra eficiência acoplada ao espectrômetro de massas (UFLC-QTOF-MS). Os extratos EMFA e EMFR apresentaram Concentração Efetiva 50% (CI50) de 11,30 e 12,70 μg/mL, respectivamente, para o ensaio DPPH. No fosfomolibdênio, EMFA apresentou 134,23% em relação a rutina e 111,19% em relação a quercetina. No ensaio de cooxidação, EMFR apresentou porcentagem de Inibição da Peroxidação Lipídica (I%) 55,58%. Em relação a toxicidade, levando-se em conta os parâmetros da ISO10993- 5:2009, nenhum extrato foi considerado citotóxico nas concentrações testadas (entre 100 e 6,25 µg/mL) mas somente os extratos EAFA (100 µg/mL) e EAFR (todas as concentrações) apresentaram atividade anti-inflamatória considerável (redução significativa de NO). Apesar disso, uma promissora atividade antimicrobiana foi encontrada em todos os extratos. Em relação aos teores de fenóis e flavonoides totais os extratos EMFA e EMFR apresentaram 109,50 e 142,55 μg/mg e 93,04 e 102,88 μg/mg respectivamente. Nos extratos EHFA e EHFR foram isolados e identificados os triterpenos derivados de acetato de alfa e beta amirina e o acetato de taraxasterol. Enquanto, nos extratos EAFA, EAFR, EMFA e EMFR foram identificadas as seguintes substâncias 6-metoxikaempferol; tetrahidroxiflavona metoxilada; trihidroxitetrametoxiflavona; eupatorin e himenoxin. Diante do exposto, podemos sugerir que E. inulaefolium possui potencial para as atividades antioxidante, antifúngica e antiinflamatória. Entretanto, estudos mais aprofundados devem ser realizados para confirmar essas atividades bem como relaciona-las com os fitoconstituintes presentes na espécie.CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superio