Formation et stabilité des photohydrates pyrimidiniques dans l’ADN

La photolyse ultraviolette (254 nm) de solutions aqueuses des copolymères poly(dC-dC) et poly(dA-dU) engendre lit formation d’hydrates pyrimidiniques. Il a été montré récemment que ce photoproduits étaient substrats de glycosylases bactériennes et de mammifères (Biochemistry. 28 : 6164, 1989). Une de ces enzymes de réparation, l’endonucléase III, a clé utilisée dans ce travail pour étudier la formation et la stabilité de cette importante classe de photoproduits pyrimidiniques dans les copolymères poly(dC-dC) et poly(dA-dU). L’irradiation du poly(dG-dC) à une dose de 100 kJ/m2 (254 nm) de lumière de l’ultraviolet lointain entraîne une conversion du résidu cytosyle en 2,2% d’hydrate de cytosine (hydroxy-6 dihydro-5,6 cytosine) et 0,09% d’hydrate d’uracile (hydroxy-6 dihydro-5,6 uracile). La stabilité des photohydrates pyrimidiniques a été étudiée en incubant les copolymères pendant une période de 24 heures à différentes températures après irradiation. L’hydrate de cytosine est stable lorsque la température est maintenue à 4°C. La stabilité de l’hydrate décroît avec l’augmentation de la température, la demi-vie étant de 75, 25 et 6 heures à des températures de 25°C, 37°C et 55°C respectivement. L’hydrate d’uracile dans le copolymère poly(dA-dU) irradié est stable à 4°C et à 25°C, et décroît avec une demi-vie de 6 heures à 37°C et de moins d’une demi-heure à 55°C. L’hydrate d’uracile et l’uracile ont été aussi détectés dans le poly(dG-dC) après une irradiation du copolymère. Une des conclusions majeures de ce travail est que l’hydrate de cytosine est relativement stable dans l’ADN à 37°C. De plus, lu décomposition de ce photoproduit s’effectue par désamination, conduisant à la formation de l’hydrate d’uracile. Ce dernier composé peut alors engendrer de l’uracile par déshydratation. La formation cl la stabilité des photohydrates pyrimidiniques dans l’ADN ont pu contribuer, au cours de l’évolution, au développement de diverses enzymes de réparation dont l’endonucléase III (et des activités enzymatiques analogues chez les organismes eucaryotes) et la glycosylase d’uracile