In vitro nematicidal activities micelium and extracts of Fusarium verticillioides and Pleurotus djamor

Os nematoides do gênero Meloidogyne são responsáveis por enormes prejuízos na agricultura, sendo considerados os principais fitopatógenos devido ao seu modo de vida endoparasitário. Ao infectar as raízes provocam sérios danos que culminam na perda de produtividade no campo. Como alternativa para controlar essa praga agrícola sem prejudicar a saúde humana e o meio ambiente, fungos nematófagos são muito utilizados, sendo considerados inimigos naturais dos nematoides. Este trabalho tem por objetivo investigar os fungos Fusarium verticillioides e Pleurotus djamor como agentes de biocontrole. Foram testadas as atividades do micélio, do extrato bruto e da protease parcialmente purificada provenientes de um isolado de F. verticillioides sobre juvenis de Meloidogyne javanica. A punficação enzimática ocorreu por meio de ultrafiltração seguida de cromatografia de troca iônica. Obteve-se um pool enzimático com um fator de purificação de 19,79 vezes e um rendimento de 1,58% que apresentou maior atividade proteolítica a 50ºC em pH 9. A protease parcialmente purificada se mostrou termoestável a 50ºC, mantendo atividade relativa superior a 50% durante 60 horas nessa temperatura. A atividade enzimática foi inibida em presença de SDS e PMSF, características associadas a serino proteases. A atividade nematicida de F verticillioides foi observada após 24h de tratamento com micélio, extrato bruto e protease parcialmente purificada, os quais promoveram redução (p < 0,01) de 71,26 %, 61,48 e 84,81% na quantidade de juvenis J2 de M. javanica vivos, respectivamente. Os resultados obtidos demonstram F. verticillioides é um organismo promissor no controle biológico de fitonematóides e seu mecanismo de ação se dá pela produção de proteases degradadoras de cutícula. Também foi avaliada a atividade nematicida do micélio de P. djamor. Na presença dos micélios houve redução (p <0,01) das formas ativas de P. redivivus em 44,61% e 86,79% após tratamento de 24 e 48 horas. Sobre M. incognita houve a redução (p < 0,01) das formas ativas de J2 em 47,42% e 50,23% nos mesmos intervalos de tempo, no entanto não se observou atividade dos micélios sobre a integridade da estrutura dos ovos. O extrato aquoso e o extrato hidroalcoólico também se mostraram eficazes sobre P. redivivus. Durante os ensaios in vitro observou-se a formação de vesículas tóxicas com atividade nematicida. Também foi possível evidenciar a penetração dos micélios fúngicos na cutícula dos nematoides após a imobilização, fato que sustenta a inclusão de P. djamor como um fungo nematófago. Palavras-chave: Biocontrole. Fungos. Nematicida.Nematodes of the genus Meloidogyne are responsible for huge losses in agriculture, being considered the main phytopathogens due to their endoparasitic way of life. When infecting the roots, they cause serious damage that culminates in the loss of productivity in the field. As an alternative to control this agricultural pest without harming human health and the environment, nematophagous fungi are widely used, being considered natural enemies of ncmatodes. This work aims to investigate Fusarium verticillioides and Pleurotus djamor as biocontrol agents. The activities of mycelium, crude extract and partially purified protease from an isolate of F. verticillioides on juveniles of Meloidogyne javanica were tested. The enzymatic punification occurred through ultrafiltration followed by ion exchange chromatography. An enzyme pool was obtained with a purification factor of 19.79 times and a yield of 1.58% that showed greater proteolytic activity at 50º C at pH 9. The partially purified protease was thermostable at 50º C, maintaining relative activity more than 50% for 60 hours at that temperature. The enzymatic activity was inhibited in the presence of SDS and PMSF, characteristics associated with serine proteases. The nematicidal activity of F verticillioides was observed after 24h of treatment at the level of mycelium, crude extract and partially purified protease, which promoted reduction (p < 0,01) of 71.26%, 61.48 and 84.81% in the number of juveniles J2 de M. javanica alive, respectively. The results obtained demonstrate F. verticillioides is a promising organism in the biological control of phytomatodes and its mechanism of action occurs through the production of cuticle-degrading proteases. The nematicidal activity of the mycelium of P. djamor was also evaluated, as well as of the aqueous and ethanolic extracts produced from this fungus. P djamor mycelia were able to reduce (p <0.01) the percentage of active forms of P. redivivus by 44.61% and 86.79% after 24 and 48 hours treatment. On M. incognita there was a reduction in the percentage (p