Evaluation of bovine serodiagnostic potential of Trypanosoma vivax antigens containing epitopes identified by phage-display

A pecuária bovina está diretamente relacionada ao crescimento econômico nacional, uma vez que esta atividade movimentou uma quantia superior a 400 bilhões de reais entre 2012 e 2017. Doenças como a tripanossomíase bovina, causada pelo protozoário Trypanosoma vivax, acometem os rebanhos acarretando enormes prejuízos à bovinocultura. Atualmente, o diagnóstico da doença é baseado na detecção do protozoário através de técnicas parasitológicas ou moleculares. No Brasil, a tripanossomíase bovina é considerada crônica e as técnicas disponíveis para o diagnóstico se mostram insuficientes para o controle e diagnóstico da patologia. Neste trabalho, técnicas de phage display, bioinformática e imunológicas foram utilizadas para identificar peptídeos e proteínas recombinantes com alta afinidade a anticorpos do soro de animais infectados. Dentre os peptídeos clones de fagos testados, 25 foram reativos com as amostras de bovinos infectados, sendo que 11 apresentaram valor máximo de sensibilidade e especificidade. Isto posto, utilizou-se da sequência dos fagos reativos para mapear proteínas de T.vivax e expressá-las em Escherichia coli. Duas proteínas foram identificadas, sendo que a Tv2 foi isolada, purificada e titulada com as amostras infectadas. Este screening inicial indicou que a proteína Tv2 possui potencial antigênico a ser explorado, visto que os valores de absorbância foram distintos entre as amostras saudáveis, as de animais infectados com demais patologias e de tripanossomíase bovina. Logo, faz-se necessário mais ensaios para avaliar e elucidar o potencial de diagnóstico da proteína Tv2.Cattle raising is directly related to national economic growth since this activity moved more than 400 billion of reais between 2012 to 2017. However, diseases such as bovine trypanosomiasis, caused by Trypanosoma vivax protozoan, affect the herds, causing enormous damage to the cattle. Currently, diagnosis of disease is based on detection of protozoan through parasitological or molecular techniques. In Brazil, bovine trypanosomiasis is considered chronic and techniques available for diagnosis are insufficient for the control and diagnosis of disease. In the present work, phage display, bioinformatics and immunological techniques were used to identify recombinant peptides and proteins with high affinity for serum antibodies from infected animals. Among the peptides phage clones tested, 25 were reactive with samples of infected cattle, and 11 presented the maximum value of sensitivity and specificity. Thus, reactive phages sequence was used to map and express T.vivax proteins in Escherichia coli. Two proteins were identified, and Tv2 was isolated, purified and titrated with the infected samples. This initial screening indicated that Tv2 protein has an antigenic potential to be explored since absorbance values were different among healthy samples, those of animals infected with other pathologies and of bovine trypanosomiasis. Therefore, further testing is needed to evaluate and elucidate the diagnostic potential of Tv2 protein