Pengaruh Ekstrak Etanol Pegagan (Centella Asiatica) Terhadap Lokomotor, Osifikasi Tulang Keras, Ekspresi Sirtuin 1 (Sirt1), Dan Apoptosis Larva Zebrafish Yang Dipapar Aluminium

Aluminium merupakan logam yang paling banyak terdapat di kerak bumi dan penggunaannya dalam kehidupan sehari-hari tidak terelakkan. Aluminium yang berada di lingkungan maupun bahan-bahan olahan bisa masuk ke dalam tubuh melalui saluran pencernaan maupun saluran olfaktori dan terakumulasi di semua jaringan mamalia, terutama di ginjal, hati, jantung, tulang dan otak. Aluminium yang terakumulasi di otak dan organ lain mengakibatkan disfungsi dan toksisitas dan merupakan faktor etiologi penting dari beberapa gangguan neurodegeneratif seperti penyakit Alzheimer, Parkinson dan penyakit neurodegeneratif kronis lainnya. Aluminium juga menjadi penyebab gangguan motorik, anemia, osteomalasia dan dementia. WHO telah menetapkan nilai ambang batas kadar aluminium di dalam minuman ialah sebesar 0,2 mg/L. Aluminium yang terakumulasi di dalam tubuh secara kronis menyebabkan munculnya penyakit dan gangguan perkembangan, namun keterpaparan pada logam ini masih dianggap remeh. Aluminium masuk menyebabkan gangguan homeostasis logam dalam tubuh dan menginduksi peningkatan reactive oxygen species (ROS) yang berlebihan. Peningkatan ROS ini mengakibatkan beberapa disfungsi dalam tubuh termasuk kematian sel atau apoptosis. Apoptosis pada sel yang berlebihan pada masa kehamilan dapat mempengaruhi proses pertumbuhan dan perkembangan. Struktur dan fungsi tubuh yang terganggu misalnya seperti gangguan osifikasi tulang dan gangguan aktivitas lokomotor. Apoptosis pada sel osteoblast menyebabkan proses osifikasi tulang menurun. Sedangkan apoptosis berlebihan terjadi pada sel dopaminergik menyebabkan gangguan pada proses lokomotor. Sirtuin 1 (SIRT1) adalah NAD+ kelas III histone deacetylase independent yang memperpanjang masa hidup sel dengan mengontrol penuaan sel, proliferasi sel, dan apoptosis sel. Sirtuin 1 bekerja dengan melakukan deasetilasi protein faktor transkripsi forkhead box O (FOXO), membuatnya menjadi inactive sehingga mencegah apoptosis sel. Pegagan adalah tanaman yang mengandung metabolit golongan triptepan dan mengandung flavonoid yang berperan sebagai antioksidan langsung atau modulator enzim yang membatasi pembentukan ROS. Tujuan penelitian ini ialah untuk mengetahui pengaruh ekstrak etanol pegagan (Centella asiatica) terhadap lokomotor, osifikasi tulang keras, ekspresi SIRT1, dan apoptosis larva zebrafish yang dipapar aluminium. Ekstrak etanol pegagan diharapkan dapat mencegah efek aluminium menyebabkan gangguan pertumbuhan dan perkembangan yang dilihat dari fungsi lokomotor dan osifikasi tulang keras melalui peningkatan SIRT1 untuk mencegah apoptosis berlebihan. Desain penelitian ini adalah true experimental dengan post test control group design only yang dilakukan pada larva zebrafish usia 2 hpf hingga 6 dpf. Embrio yang terpilih dikelompokkan ke dalam 5 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif tanpa perlakuan apapun, kelompok kontrol positif yang diberikan AlCl3 50 μM, kelompok perlakuan 1 yang diberikan AlCl3 50 μM dan pegagan 1,25 μg/ml, kelompok perlakuan 2 yang diberikan AlCl3 50 μM dan pegagan 2,5 μg/ml, dan kelompok perlakuan 3 yang diberikan AlCl3 50 μM dan pegagan 5 μg/ml. Paparan diberikan sejak usia 2 hpf dan dipertahankan hingga larva usia 3 dpf. Pengukuran lokomotor dilakukan pada usia 4, 5 dan 6 dpf. Pengukuran osifikasi tulang menggunakan pewarnaan alizarin red dilakukan pada usia 6 dpf dan dianalisis menggunakan software ImageJ. Pengukuran SIRT1 dilakukan pada larva usia 6 dpf menggunakan metode RT-PCR setelah larva dihomogenkan dan diisolasi RNA. Untuk pengukuran apoptosis dilakukan pada usia 3 dpf dengan pewarnaan acridine orange dan difoto menggunakan mikroskop fluorensens dengan filter berwarna hijau. Data yang ada dianalisis menggunakan program SPSS v.25.0 dengan uji normalitas saphiro-wilk, uji homogenitas menggunakan Levene Test, uji one-way ANNOVA dan uji korelasi Pearson. v Hasil penelitian menunjukkan bahwa adanya penurunan lokomotor dan osifikasi tulang pada larva zebrafish yang dipapar aluminium ditunjukkan dengan adanya perbedaan signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan. Ekspresi SIRT1 pada larva yang dipapar aluminium juga mengalami penurunan meskipun secara statistik tidak signifikan. Apoptosis yang meningkat diamati pada larva yang dipapar aluminium pada usia 3 dpf dan berbeda signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok perlakuan. Ada hubungan yang signifikan, sangat kuat dan searah antara osifikasi tulang dan aktivitas lokomotor larva zebrafish. Berdasarkan hasil tersebut diketahui bahwa aluminium dapat menyebabkan gangguan pertumbuhan dan perkembangan yang dilihat dari penurunan osifikasi tulang dan penurunan aktivitas lokomotor melalui penurunan SIRT1 dan peningkatan apoptosis sel. Aluminium masuk dan secara kompetitif menggantikan posisi logam yang dibutuhkan oleh tubuh sepeti besi dan kalsium dan memicu peningkatan ROS dan apoptosis. Pegagan memiliki bahan aktif yang dapat menekan produksi ROS berlebih dalam tubuh. Pegagan dengan bahan aktifnya asiatic acid dan quarcetin dapat meningkatkan ekspressi SIRT1 melalui peningkatan NAD+/NADH dan AMPK. Quarcetin juga berfungsi sebagai kelator yang dapat langsung mengikat logam sebelum memasuki sel dan dibawa untuk dieksresikan dari tubuh. Kesimpulan penelitian ini adala ekstrak etanol pegagan (Centella asiatica) dapat mencegah penurunan lokomotor, penurunan osifikasi tulang keras, penurunan ekspresi SIRT1, dan peningkatan apoptosis larva zebrafish yang dipapar aluminium