Therapeutic use of the adipose-derived stromal vascular fraction : standardization and characterization of the impact of cardiovascular risk factors on biological properties

La Fraction Vasculaire Stromale (FVS) est une suspension cellulaire hétérogène. L’activité synergique de l’ensemble des cellules la composant lui confère des propriétés biologiques multiple. L’apparente facilité de production de FVS a déclenché un engouement pour son utilisation en clinique. Pourtant de nombreux facteurs peuvent avoir une influence sur la qualité et la sécurité de ce MTI. Ce travail de thèse a pour objectif de caractériser l’impact de ces éléments technologiques et biologiques. Le premier volet de ce travail a consisté à développer un protocole de production standardisé, conforme aux Bonnes Pratiques de Fabrications, de la FVS permettant l’obtention d’une substance active optimisée. Une large étude rétrospective multicentrique de FVS de grade thérapeutique a été réalisée ensuite pour progresser vers la standardisation des contrôles qualités appliqués à la FVS. L’analyse de presque trois cents FVS cliniques a abouti à la proposition de critères libératoires. Le troisième volet de ce travail s’est intéressé à la caractérisation biologique de la FVS en contexte autologue de facteurs de risque vasculaire : l’âge et le diabète. L’impact de l’âge a été évalué grâce à un modèle de FVS issue de tissu adipeux périrénal de donneurs à critères élargis. Cette étude a mis en évidence une signature inflammatoire, avec une proportion de lymphocytes Natural Killer plus élevée au sein de la FVS et une expression de cytokines pro-inflammatoires, corrélée à l’âge. L’investigation de l’impact du diabète sur la FVS a montré l’existence d’un effet délétère marqué sur le contingent endothélial (augmentation de la sénescence et la réduction des propriétés angiogéniques).The Stromal Vascular Fraction (SVF) is a heterogeneous cell suspension. The synergistic activity of all the cell-subset confer to SVF its biological properties. The apparent easy production of SVF has increased its use in the clinic. However, many factors may have an influence on the quality and safety of this ATMP. This work aims to characterize the impact of these technological and biological elements. The first part of this work consisted in developing a standardized, compliant to the Good Manufacturing Practices, manufacturing protocol for the SVF. Then, a large retrospective multicenter study of therapeutic grade FVS was carried out to progress towards the standardization of quality controls applied to this cellular product. The analysis of almost three hundred clinical SVF resulted on a proposal of release criteria for the finished product. The third part of this work is concerned with the biological characterization of SVF in the autologous context of vascular risk factors: age and diabetes. The impact of age was assessed using a model of SVF derived from perirenal adipose tissue from extended-criteria donors. This study demonstrated an inflammatory signature, with a higher proportion of Natural Killer lymphocytes within the SVF and an expression of pro-inflammatory cytokines, correlated with age. The investigation of the impact of diabetes showed the existence of a marked deleterious effect on the endothelial contingent, evidenced by the increase in senescence and the reduction in angiogenic properties