Izražaj tirozin kinaznih receptora - EGFR, Her-2, c-kit i ciklina D1 u kolorektalnim karcinomima : doktorski rad

Ciljevi istraživanja: ispitati izražaj tirozin kinaznih receptora i ciklina D1 u rutinskom, nasumce odabranim uzorcima, 135 primarnih karcinoma debelog crijeva. Od tirozin kinaznih receptora cilj je bio najprije imunohistokemijski ispitati membranski (mEGFR) i nuklearni (nEGFR) izražaj EGFR te izražaj Her-2, c-kit proteina a potom utvrditi njihovu međusobnu udruženost kao i udruženost s ciklinom D1. Osim proteinskog izražaja cilj je bio ispitati i gensku amplifikaciju EGFR i Her-2 te ju usporediti s proteinskim izražajem navedenih markera. Konačno, cilj je bio usporediti proteinski izražaj i genski status navedenih receptora s prognostičkim parametrima, histološkim stupnjem diferencijacije i stadijem proširenosti bolesti (Dukes klasifikacija). Materijali i metode: imunohistokemijski je obrađeno 135 uzoraka tkiva arhivskog materijala adenokarcinoma različitih lokalizacija tako što se mEGFR, i c-kit izražajnost analizirala na potpunim rezovima, a nEGFR, Her2 i ciklin D1 izražaj na tkivnim mikroarejima. Procjena imunoreaktivnosti navedenih markera utvrđena je prema intenzitetu obojenosti i postotku pozitivnih tumorskih stanica. Florescentnom in situ hibridizacijom analiziran je genski status za EGFR i Her2 (Vysis, Downers Grove, IL, SAD). Stanice s normalnim brojem kromosoma 7 imale su dva narančasta i dva zelena signala po jezgri ili omjer ≤ 2.0 - 2.49, amplifikacija se definirala ako je taj omjer bio ≥ 2,94, odnosno polisomija, ako je bilo nađeno više od dva CEP7 signala po jezgri na više od 40% tumorskih stanica, ili ako je taj omjer bio između 2.5 – 2.93. Za analizu statusa HER2 gena određivao se omjer zbroja Her-2 signala i kontrolnih CEP17 signala na ukupno 20 jezgara tumorskih stanica. Amplifikacija se definirala kao omjer > 2,2, a amplifikacije Her-2 gena nije bilo ako je omjer 2.2, and amplification Her-2 gene was not, if the ratio