Cardiac autonomic dysfunction and Fos expression at Medulla oblongata in a model of chronic non-inflammatory widespread pain in rats

Fibromyalgia (FM) is characterized by chronic non-inflammatory widespread pain (CWP) and changes in sympathetic function. In attempt to elucidate the pathophysiological mechanisms of FM we used a well-established CWP animal model. We aimed to evaluate changes in cardiac autonomic balance and baroreflex function in response to CWP induction in rats. Therefore, it was used 30 male Wistar rats (250-350 g) with 2 to 3 months. CWP was induced by two injections of acidic saline (pH 4.0, n=16) five days apart into the left gastrocnemius muscle, whereas control animals were injected twice with normal saline (pH 7.2, n = 14). To evaluate changes in cardiovascular responses, one day after the second injection of acidic saline (n=8) or normal saline (n=6) animals were instrumentated to blood pressure recordings and posterior analysis of pulse interval (PI) and systolic arterial pressure (SAP) variability, and spontaneous baroreflex sensitivity (BRS) was performed. To determine the involvement of areas of the CNS (NTS , RVLM and CVLM ), two days after the second injection of acidic saline (n=8) or normal saline (n=8) animals were anesthetized, perfused, the brains removed and cut in a cryostat. The brain sections were subjected to immunofluorescence protocol for Fos protein. Results are expressed as mean ± SEM. Differences between groups were analyzed using by t test, paired and unpaired. Values of p < 0.05 were considered statistically significant. After induction of CWP, there was an increase of power in the low frequency (LF) band of PI spectrum (12.75±1.04 nu), a decrease in the high frequency (HF) band (87.25±1.04 nu) and an increase of LF/HF ratio (0.16±0.01), when compared to control animals (7.83±1.13 nu LF; 92.16±1.13 nu HF; 0.08±0.01 LF/HF). In addition, there was an increase of power in the LF band of SAP spectrum (7.93±1.39 mmHg2) when compared to control animals (2.97±0.61 mmHg2). BRS was lower in acidic saline injected rats (0.59±0.06 ms/mmHg) when compared to control animals (0.71±0.03 ms/mmHg). By immunofluorescence , we found that in all investigated areas the percentage of Fos immunoreactive cells was significantly higher ( p < 0.001) in saline acidic compared to neutral saline group. Our results showed that induction of CWP in rats shifts cardiac sympathovagal balance towards sympathetic predominance and decreases BRS, data which corroborate findings in humans with FM, and also that activation of NTS, CVLM and RVLM appears to indicate the involvement of these areas in an attempt to control the cardiac autonomic dysfunction.A fibromialgia (FM) é caracterizada por dor muscular crônica difusa não-inflamatória (DMCD) e mudanças na função simpática. No intuito de elucidar os mecanismos fisiopatológicos da FM, foi utilizado um modelo animal de dor crônica difusa bem estabelecido na literatura. Desta forma, o objetivo do estudo foi avaliar a modulação autonômica cardíaca e a função do barorreflexo, em resposta à indução de dor muscular crônica difusa em ratos. Para tanto, foram utilizados 30 ratos Wistar machos (250 a 350g) com 2 a 3 meses. A DMCD foi induzida por duas injeções de solução salina ácida (pH 4,0, n=16) com cinco dias de intervalo, no músculo gastrocnêmio esquerdo, enquanto que os animais controle foram injetados duas vezes com solução salina neutra (pH 7,2, n=14). Para avaliar as alterações nas respostas cardiovasculares, um dia após a segunda injeção de solução salina ácida (n=8) ou salina neutra (n=6) os animais foram instrumentados para gravações da pressão arterial, e posterior análise da variabilidade do intervalo de pulso (IP) e da pressão arterial sistólica (PAS), como também da sensibilidade espontânea do barorreflexo (SBR) foi realizada. Para avaliar a ativação de neurônios em núcleos do Bulbo envolvidos com a modulação autonômica cardíaca (NTS, RVL e CVL), dois dias após a segunda injeção de salina ácida (n = 8) ou de solução salina normal (n=8), os animais foram anestesiados, perfundidos, o cérebro removido e cortado num criostato. As secções do cérebro foram submetidas ao protocolo de imunofluorescência para a proteína Fos. Os resultados são expressos como média ± EPM. Diferenças entre os grupos foram analisados pelo teste t, pareado e não-pareado. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Após a indução de dor crônica difusa nos ratos (n=8), as variações do intervalo de pulso apresentaram maior oscilação em baixa frequência (LF) (12,75±1,04 un), menor oscilação em alta frequência (HF) (87,25±1,04 un) e maior valor da relação LF/HF (0,16±0,01), quando comparadas ao grupo controle (n=6) (7,83±1,13 un LF; 92,16±1,13 nu HF; 0,08±0,01 LF/HF). Em adição, houve maior oscilação em LF da pressão arterial sistólica (PAS) (7,93±1,39 mmHg), comparado ao grupo controle (2,97±0,61 mmHg). A sensibilidade espontânea do barorreflexo foi menor nos ratos injetados com salina ácida (0,59±0,06 ms/mmHg) quando comparada ao grupo controle (0,71±0,03 ms/mmHg). Através da imunofluorescência, observou-se que em todas as regiões investigadas a porcentagem de células imunorreativas à Fos foi significativamente maior (p