Efeito do alopurinol sobre as repercussões da isquemia e reperfusão nos membros caudais de ratos wistar

Orientador: Prof. Dr. Jorge Eduardo Fouto MatiasCoorientador: Prof. Dr. João Carlos Domingues RepkaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa : Curitiba, 20/12/2007Inclui referências: p. 112-128Resumo: Introdução: A isquemia é um dos problemas mais frequentes e desafiadores com que os cirurgiões vasculares se defrontam e é ao mesmo tempo paradoxal, pois, ao restabelecer o fluxo sanguíneo para um tecido podem ser desencadeadas alterações locais ou sistêmicas mais intensas que a isquemia per se. Estas complicações estão relacionadas com liberação de radicais livres de oxigênio e citocinas pró-inflamatórias. Objetivo: Avaliar a ocorrência de estresse oxidativo após 2 ou 3 horas de isquemia de membros caudais. Verificar se em vigência de estresse oxidativo secundário à isquemia e reperfusão de membros caudais ocorrem endotoxemia, translocação bacteriana e liberação hematogênica de TNFa. Definir os efeitos do alopurinol na vigência de estresse oxidativo secundário à isquemia e reperfusão de membros caudais quanto à ocorrência de endotoxemia, translocação bacteriana e liberação hematogênica de TNFa. Método: Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa em Animais do Hospital Angelina Caron sob protocolo 08/04. Foram utilizados 60 ratos Wistar com pesos de 256,3 ± 8,48 gramas separados em dois grupos. O primeiro grupo denominado de grupo controle (C), n= 30, composto por animais tratados com solução fisiológica. O segundo grupo foi composto por ratos tratados com alopurinol, denominado grupo alopurinol (A), n=30. Cada um destes grupos foi subdividido em três subgrupos de 10 ratos sendo que em cada subgrupo foi submetido diferentes tempos de isquemia: 2 horas (C2h e A2h) e 3 horas (C3h e A3h) e os subgrupos simulação os quais não foram submetidos à isquemia (CS e AS). Nos grupos simulação foi procedida laparotomia mediana xifopúbica, dissecação do peritônio parietal posterior e separação da veia cava da aorta infra-renal. Nos grupos isquemia por duas horas, após o procedimento anterior foi instalado um clampe e procedida isquemia por 2 horas e da mesma forma no grupo isquemia por 3 horas. Três dias após foram coletadas amostras de sangue para hemocultura e dosagens de TNF alfa e endotoxina, fragmentos intestinais para dosagem de substâncias redutoras do ácido tiobarbitúrico (TBARS) e rins, fígado, baço e linfonodos mesentéricos para a pesquisa de translocação bacteriana. Utilizou-se o teste de ANOVA e os valores de p<0,05 indicaram significância estatística. Resultados: Foram observadas diminuições nas dosagens de TBARS (nmol/mg de proteína) nos intestinos dos ratos tratados pelo alopurinol após duas e três horas de isquemia 0,373+0,038 e 0,391+0,045, em relação aos não tratados 0,720+0,070 e 0,836+0,053 (p<0,001); TNF alfa circulante (pg/ml) de 34,1+9,3 e 280,7+93,6 (duas e três horas de isquemia e tratados pelo alopurinol), em relação aos não tratados 347,1+101,9 e 749,6+99,6 (p<0,001); Endotoxinas circulantes (UE/ml) de 0,0117+0,02 e 0,0195+0,03 para os tratados pelo alopurinol após duas e três horas de isquemia e 0,0429+0,06 e 0,1092+0,05 para os não tratados (p<0,001); Taxas de translocação bacteriana de 0,7+0,48 e 2,4+0,97 após isquemia e tratamento e 0,8+0,42 e 3+0,67 para os não tratados. Conclusão: Em relação ao grupo simulação ocorreram aumentos do estresse oxidativo secundário à isquemia e reperfusão de membros caudais, indicados pela lipoperoxidação no intestinal. O estresse oxidativo intestinal induziu endotoxemia, translocação bacteriana e níveis séricos de TNFa. O alopurinol exerceu efeito protetor mas não a completa inibição dos danos causados pela isquemia reperfusão, evidenciados pelas diminuições do estresse oxidativo intestinal, da endotoxemia, da translocação bacteriana e dos níveis séricos de TNFa.Abstract: Introduction: Ischemia is one of the most frequent and challenging problems that vascular surgeons are faced w ith, and at the same time it is a paradox because on reestablishing the blood flow to a tissue, local or systemic alterations can be caused that are more intense than the ischemia itself. These alterations have to do with the release of free radicals of oxygen and pro-inflammatory cytokines. Aim : To evaluate the effects of allopurinol in the occurrence of intestinal oxidative stress, endotoxemia, bacterial translocation and the release of tum or necrosis factor alpha (TNF) in rats submitted to ischemia and reperfusion of the hind limbs. Method: This study was performed after approval by the Ethics Com m ittee on Animal Research under protocol number 08/04. Sixty W istar rats were used, weighing 256.3 ± 8.48 grams and split into two groups of thirty. The control group (C), was made up of animals treated with physiological solution. The second group was made up of rats treated with allopurinol (A). Each of the groups was divided into three sub-groups of ten rats, with each sub-group being submitted to ischemia for different times: two hours (C2h and A2h), three hours (C3h and A3h) and the simulation sub-groups which were not submitted to ischemia (CS e AS). For the simulation groups there was a procedure of median xyphopubic laparotomy, dissection of the posterior parietal peritoneum and separation of the vena cava of the infra-renal aorta. In the groups submitted to two hours of ischemia, following the previous procedure a clamp was installed and ischemia proceeded for two hours. The three hour ischemia took place in the same way. Three hours later, blood samples were collected for hemoculture and dosages of TNF alpha and endotoxin, intestinal fragments for dosages of substances for reducing thiobarbituric acid (TBARS) and kidneys, liver, spleen and mesenteric lymphonodes for the study of bacterial translocation. The ANOVA test was used and values of p<0.05 indicate statistical significance. Results: Reductions in the dosages of TBARS were observed (nmol/mg of protein) in the intestines of the rats treated with allopurinol after two and three hours of ischemia 0.373+0.038 and 0.391+0.045 when compared to those not treated 0.720+0.070 and 0.836+0.053 (p<0.001); circulating TNF alpha (pg/ml) of 34.1+9.3 and 280.7+93.6 (two and three hours of ischemia and treated with allopurinol) in comparison with those not treated 347.1+101.9 and 749.6+99.6 (p<0.001); circulating endotoxins (UE/ml) of 0.0117+0.02 and 0.0195+0.03 for those treated with allopurinol after two and three hours of ischemia and 0.0429+0.06 and 0.1092+0.05 for those not treated (p