Caracterização química, atividade imunomoduladora e antioxidante de extratos aquosos e hidroalcoólicos da goma de exsudato vegetal de anacardium occidentale L. E de folhas de Persea americana Mill.

Orientadora: Profª Drª Juliana Bello Baron MaurerCoorientadora: Profª Drª Selma Faria Zawadzki BaggioDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências-Bioquímica. Defesa: Curitiba, 28/02/2013Inclui referências: p. 125-135Resumo: Duas espécies medicinais foram objetos de estudo do presente trabalho, o Anacardium occidentale (cajueiro) que é uma espécie nativa do Brasil e a Persea americana, ou abacateiro, é uma espécie nativa do México. Tanto a goma de exudato do cajueiro quanto as folhas do abacateiro são utilizadas na medicina popular na forma de infusão ou decocto em função de suas propriedades anti-inflamatórias, antiasmática, anti-infecciosa, antirreumática e antioxidante. O polissacarídeo nativo obtido da goma de exudato do cajueiro (CNTG) e a fração arabinogalactana-proteina (CNTG-AGP) foram avaliados em relação à atividade imunomoduladora (macrófagos peritoneais de camundongos). As referidas frações além dos derivados obtidos por sulfatação química do CNTG foram avaliados em relação à atividade antioxidante in vitro. Tanto CNTG como CNTG-AGP apresentaram um efeito anti-inflamatório, com diminuições, em 160?g/mL, na taxa de TNF-? (CNTG-25%; CNTG-AGP-11%), IL1-? (CNTG-61%; CNTG-AGP-61%), IL6 (CNTG-43; CNTG-AGP- 54%) e aumentos em IL10 (CNTG-92%) sem citotoxicidade avaliada pelo teste de viabilidade (MTT), dosagem de NO e atividade fagocítica (vermelho neutro). A atividade antioxidante de CNTG é bem baixa para a captação de DPPH, OHo, NOo e poder redutor e um pouco maior para a captação de O2o- (EC50%=7,4x103?g/mL). Quando submetida a um (CNTGS1-1,6% de sulfato; DS=0,03) e dois ciclos (CNTGS2-7,9% de sulfato; DS=0,15) de sulfatação química, a atividade antioxidante foi aumentada para a captação de NOo (CNTGS1 EC50%=266,3x103?g/mL; CNTGS2 EC50%=1,4x103?g/mL) e principalmente para o O2o- (CNTGS1 EC50%=1,7x103?g/mL; CNTGS2 EC50%=134,7?g/mL). As folhas do abacateiro foram submetidas a três formas de extração: hidroalcoólica (EH), infusão aquosa (IA) e decocção (DA-fração precipitada). O EH apresentou maiores teores de fenólicos (21,1%) e maior atividade antioxidante (EC50%=44,3; 149,2; 171,3; 99,2?g/mL para DPPH, OHo, NOo e O2o-, respectivamente). O IA apresentou cerca de 17,6% de compostos fenólicos e EC50%=239,9; 990,9; 141,7; 80,0?g/mL para DPPH, OHo, NOo e O2o-, respectivamente). Já o precipitado DA com 3,7% de fenólicos apresentou EC50%=536,0; 2,2x103; 20,7x103; 79,8?g/mL para DPPH, hidroxil, NO e superóxido, respectivamente). Foi observada alta correlação entre EC50% dos radicais e % compostos fenólicos para os ensaios de captação do DPPH (r=-0,98), OHo (r=-0,97) e NOo (r=-0,98) e ausência de correlação com ânion O2o- (r=+0,66). A fração AGP (FRAGP) das folhas de P. americana apresentou alta atividade de captação do O2o-, (EC50%=277,6?g/mL) sugerindo que a captação seja realizada pela AGP desta fração. A caracterização química de FRAGP mostrou 69,1% de carboidratos, 1,7% de urônicos, 2,7% de fenólicos e 13,1% de AGPs. A composição monossacarídica apresentou 50; 28; 8; 7 e 7% de Ara, Gal, Glc, Xyl e Rha, respectivamente, e poucos unidades de Fuc e Man. Pelo ensaio de metilação, a estrutura parece ter uma cadeia central formado por Gal (1?3) altamente ramificada em O-6 e O-4 e unidades terminais de Gal (5%), mas principalmente Ara (40%). Os resultados indicam que a goma de exsudato vegetal de A. occidentale possui atividade anti-inflamatória mediada por aumentos nos níveis de IL10 principalmente. Para P. americana, os resultados sugerem alta atividade antioxidante dos extratos hidroalcoólicos e infusão aquosa, e a presença de uma AGP clássica com pequena atividade de captação de radicais ânion O2o- presente nas folhas.Abstract: Two medicinal species were objects of study of this work, Anacardium occidentale (cashew), native from Brazil and Persea americana, or avocado, native from Mexico. Both the gum exudates cashew as avocado leaves are used in popular medicine like infusion or decoction due its anti-inflammatory, anti-asthmatic, anti-infective, antirreumática and antioxidant activities. The native polysaccharide obtained from the cashew tree gum exudate (CNTG) and its arabinogalactan-protein fraction (CNTG-AGP) were evaluated for immunomodulatory activity (peritoneal macrophages of mice). Those fractions and its derivatives obtained by chemical sulphation were evaluated for in vitro antioxidant activity. Both CNTG as CNTG-AGP showed an antiinflammatory effect, with decreases in 160?g/mL, the rate of TNF-? (CNTG-25%; CNTG-AGP-11%), IL1-? (CNTG-61%; CNTG-AGP, 61%), IL6 (CNTG-43; CNTG-AGP, 54%) and increases in IL10 (CNTG-92%) without cytotoxicity, evaluated by viability test (MTT assay), NO levels and phagocytic activity (neutral red assay). The antioxidant activity of CNTG is quite low for scavenging DPPH, OHo, NOo and reducing power, and a little bit more for capturing O2o - radical (EC50%=7,4x103?g/mL). When submitted to one (CNTGS1-1,6% of sulfate; DS=0,03) and two cycles (CNTGS2-7,9% of sulfate; DS=0,15) of chemical sulfation, the antioxidant activity was increased for scavenging of NOo (CNTGS1 EC50%=266,3x103?g/mL; CNTGS2 EC50%=1,4x103?g/mL) and mainly for O2o- (CNTGS1 EC50%=1,7x103?g/mL; CNTGS2 EC50%=134,7?g/mL). The leaves of avocado were subjected to three types of extraction: hydroalcoholic (EH), aqueous infusion (IA) and decoction (DA-precipitated fraction). The EH had higher levels of phenolics (21,1%) and higher antioxidant activity (EC50%=44,3, 149,2, 171,3, 99,2?g/mL for DPPH, OHo, NOo and O2o- , respectively). The IA presented about 17,6% of phenolic compounds and EC50%=239,9, 990,9, 141,7, 80,0?g/mL for DPPH, OHo, NOo and O2o-, respectively). The precipitate DA with 3,7% phenolic, showed EC50%=536,0, 2,2x103, 20,7x103, 79,8?g/mL for DPPH, OHo, O2o- and NOo, respectively). High correlation was observed between EC50% of radicals with % of the phenolic compounds for testing of DPPH (r = -0.98), OHo (r = -0.97) and NOo (r = -0.98) and lack of correlation with anion O2o- (r = +0.66). The AGP fraction (FRAGP) leaves of P. americana showed high activity uptake of O2o-, (EC50%=277,6?g/mL) suggesting that the capture is held by its AGP fraction. The chemical characterization of FRAGP showed 69.1% of carbohydrate, 1.7% of uronic acids, 2.7% phenoics and 13.1% of AGPs. Monosaccharide composition showed 50, 28, 8, 7 and 7% for Ara, Gal, Glc, Xyl and Rha respectively, and a little of Man and Fuc. At methylation assay, the structure appears to have a central chain formed by Gal (1 ? 3) highly branched at O-6 and O-4 and Gal terminal residues (5%), but mainly Ara (40%). The results indicate that the exudate gum of A. occidentale has an anti-inflammatory activity mediated mainly by increases in of IL10 levels. For P. americana, the results suggest high antioxidant activity of aqueous infusion and hydroalcoholic extracts, and the presence of a classical AGP with small activity against anion O2o- radicals present in the leaves