The study of the alteration of genetic expression in Aspergillus nidulans strains submited to the heterologous RNA treatment

Fungos filamentosos, em particular Aspergillus , têm sido explorados pela sua habilidade em produzir altos níveis de proteínas extra-celulares de maneira econômica. Desde que muitas proteínas humanas com potencial terapêutico são secretadas e requerem modificação pós-tradução para apresentarem atividade biológica, sistemas de expressão-secreção têm sido alvo de pesquisas. Desenvolvimentos recentes em sistemas de transformação mediada por DNA, tem permitido a utilização do Aspergillus como hospedeiro para produção de proteínas de interesse biotecnológico, uma vez que, esse fungo apresenta características interessantes, tais como, genética bem caracterizada e a disponibilidade de muitos mutantes. Em trabalhos anteriores, realizados pelo nosso grupo, protoplastos de Aspergillus nidulans foram tratados com RNA de uma linhagem de Saccharomyces cerevisiae altamente produtora de insulina. Através desta metodologia foram obtidas linhagens instáveis que apresentavam rápido consumo de glicose do meio de cultura. A análise da instabilidade mitótica das linhagens tratadas, foi realizada através da observação da alteração do comportamento dos seus marcadores genéticos e dos seus setores. O tratamento com RNA foi o responsável tanto pela instabilidade, como por promover ativação/inativação gênica, mitótica e meiótica evidenciada através da análise das variações das sequências de recombinações nos cruzamentos das linhagens tratadas, com linhagens Manter de Aspergillus nidulans . A alteração do perfil protéico e micotoxigênico das linhagens tratadas em relação à linhagem controle UT448, nos permitiu, comprovar o efeito estressante do tratamento com RNA no genoma das linhagens. As linhagens tratadas não apresentaram o gene da insulina inserido nos seus genomas. O elevado consumo de glicose nestas linhagens foi decorrente de um aumento na produção da enzima glicose oxidase, evidenciado nos sobrenadantes das culturas.Filamentous fungi of the genus Aspergillus have been intensively used as receptors strains to express heterologous proteins mainly due to their ability to secrete high levels of extra cell proteins in a very economic way. In the present case, protoplasts of Aspergillus nidulans were submited to a treatnnnt with heterologous RNA from Saccharomyces cerevisiae strain that was able to produce high amounts of insulin. This method allowed us to obtain unstable strains that showed a fast consumption of glucose from the culture media. The RNA treatment may be responsible for this unstability as well as for the unleash of the genetic activation and inactivation mechanism demonstrated by frequency of recombination in the crosses of the treated strains and master strains of Aspergillus nidulans . The alterations in proteic and mycotoxin profile of the treated strains with reference to the contral strains UT 448, allowed us to prove the stressed effect of the treatment with RNA in the genomic of the strains. The treated strains did not show the insulin gene inserted into their genome. The high comsuption of glucose in these strains is a consequence of an increase in glucose oxidase enzyme, as shown in the supernatant cultures