Circulating Respiratory Syncytial Virus in pediatric patients: molecular epidemiology and genetic characterization resulting Palivizumab resistance.

O Vírus Sincicial Respiratório Humano (HRSV) é o principal causador de infecções respiratórias em crianças, responsável por 3.8 milhões de admissões hospitalares resultantes em 74.500 mortes por ano. O HRSV é um membro da família pneumoviridae, com um genoma expressando 10 genes e codificando 11 proteínas e com dois subtipos conhecidos (A e B). A única profilaxia e tratamento para o vírus é o MAb Palivizumab (PVZ) que impossibilitam a infecção. Mutações de resistência ao PVZ já foram reportadas no mundo, mas no Brasil estes dados são desconhecidos. O Objetivo deste trabalho foi determinar os genótipos circulantes e possíveis mutantes de escapes ao PVZ nos anos 2017 a 2019. Neste estudo, recebemos 3.038 amostras de ANF de pacientes pediátricos atendidos no Hospital Universitário da USP, previamente testados para HRSV por IF. Destas, 817 (26,9%) foram positivos para o vírus e 383 (46,9%) dessas amostras foram sequenciadas pelo método de Sanger que resultou em 219 (57,1%) amostras de HRSV do subtipo A e 164 (42,9%) do HRSVB. O subtipo A foi predominante em 2017 e 2019 enquanto o subtipo B em 2018. A análise filogenética mostrou a dominância dos genótipos ON1 e BA9. Uma inserção de dois aminoácidos em uma região nunca descrita foi encontrada em uma amostra do genótipo ON1 e a predição de sua estrutura mostrou alterações conformacionais importantes na proteína G. Pelo método de Pyrosequenciamento não foi encontrada nenhuma amostra com perfil de resistência ao PVZ. O HRSV é um vírus de grande importância para saúde pública e nosso trabalho demonstrou que hoje em SP, somente circulam 2 genótipos do HRSV, com alternância anual de predominância e com uma glicoproteína de superfície maleável capaz de resistir a mutações, garantindo escape imunológico. Além disso, a utilização do Palivizumab como profilaxia, parece ainda ser eficiente, pois não foram encontrados mutantes de escape ao monoclonal em nossas amostras.The Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) is a leading cause of respiratory infections in pediatric patients, responsable for 3,8 million hospital admissions resulting in 74,500 deaths each year. HRSV is a member of the pneumoviridae family expressing 10 genes coding 11 proteins. There is two HRSV subtypes (A and B), each one of them containing differents genotypes through analysis of the surface glycoprotein G. The only prophylactic and treatment measurement for HRSV infections is the MAb Palivizumab (PVZ) that binds to ta F protein site impossibilitating vírus infection. Mutations generating Palivizumab resistance have already been reported worldwide, but there is no current data regarding escape mutants in Brazil. The objective of this study was analyse the HRSV circulation in the city of São Paulo identifying the circulating genotype and possible Palivizumab scape mutants through 2017 to 2019. A total of 3308 nasopharyngeal aspirates were received from the University Hospital. Those samples were previously tested of HRSV by immunofluorescence assay, resulting in 817 (24,7%) positive samples for HRSV and 383 (46,9%) of those were analyse by Sanger sequencing resulting in 219 (57,1%) HRSVA samples and 164 (42,9) HRSVB. Subtype A was predominant in 2017 and 2019, while subtype B in 2018. Phylogenetic analysis showed dominance of the genotypes ON1 and BA9. A never reported two aminoacids insertion was found in the Heparin Binding Region of the G protein. Structural prediction showed conformational changes in the G protein. Pyrosequencing method was used for search of Palivizumab previously reported resistance mutations, none of them were found. In conclusion, HRSV have a major public health importance, containing a plastic surface glycoprotein capable of resistance multiple mutations ensuring immunologic evasion. Furthermore, Palivizumab applications should remain efficient since no mutations were found in this study