The study of secondary metabolites in plant tissue cultures II

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacognosy Student: Nikola Urbanová Supervisor: PharmDr. Marie Kašparová, Ph.D. Title of diploma thesis: The study of secondary metabolites in plant tissue cultures II The aim of this work was to determine the effect of the potential elicitor chitosan on production of podophyllotoxin in callus and suspension cultures of Juniperus virginiana Glauca variety and suspension cultures of Juniperus virginiana Hetzii variety. Schenk and Hildebrandt medium supplemented with α-naphtylacetic acid (3.0 mg/l), kinetin (0.2 mg/l) and ascorbic acid (15.0 mg/l) was used for the cultivation. Chitosan solutions of various concentrations (0.001; 0.01; 0.1; 1 g/100 ml) were affecting the cultures for 6, 24, 48 and 168 hours. The content of chitosan was determined by HPLC. Higher values of podophyllotoxin content were measured in cultures derived from the Glauca variety. The best chitosan effect on podophyllotoxin production was manifested in callus cultures after 24 hours application of 0.001 g/100ml concentration. A podophyllotoxin content of 0.210 % was determined, which was about 320 % higher in comparison with the control. The maximum content (0.140 %) in suspension culture was induced by 24-hours application of a 0.1 g/100 ml concentration;...Univerzita Karlova Farmaceutická fakulta v Hradci Králové Katedra farmakognozie Student: Nikola Urbanová Vedoucí diplomové práce: PharmDr. Marie Kašparová, Ph.D. Název diplomové práce: Studium sekundárních metabolitů v rostlinných explantátových kulturách II Cílem této práce bylo zjistit vliv potencionálního elicitoru chitosanu na produkci podofylotoxinu v kalusové a suspenzní kultuře Juniperus virginiana varieta Glauca a v kalusové kultuře Juniperus virginiana varieta Hetzii. Ke kultivaci bylo použito médium dle Schenka a Hildebrandta, které bylo doplněno o kyselinu α-naftyloctovou (3,0 mg/l), kinetin (0,2 mg/l) a kyselinu askorbovou (15,0 mg/l). Kultivary byly elicitovány roztoky chitosanu o různých koncentracích (0,001; 0,01; 0,1; 1 g/100 ml) po dobu 6, 24, 48 a 168 hodin. Obsah podofylotoxinu byl stanoven HPLC. Vyšší hodnoty obsahu podofylotoxinu byly naměřeny v kulturách odvozených od variety Glauca. Maximálního obsahu podofylotoxinu (0,210%) bylo dosaženo v kalusové kultuře po 24 hodinovém působení elicitoru o koncentraci 0,001 g/100ml. Při porovnání s kontrolní kulturou došlo ke zvýšení produkce o 320 %. U suspenzní kultury byl naměřen nejvyšší obsah metabolitu (0,140 %) po 24 hodinovém působení roztoku elicitoru o koncentraci 0,1 g/100 ml. Produkce se v tomto případě zvýšila o 211 %....Katedra farmakognozieDepartment of PharmacognosyFaculty of Pharmacy in Hradec KrálovéFarmaceutická fakulta v Hradci Králov