SOMACLONAL VARIATION OF Phanaenopsis sp. var. Dudu PLANTS REGENERATED BY DIRECT SOMATIC EMBRIOGENESIS

Actualmente existe una creciente demanda de híbridos de Phalaenopsis sp., por lo cual es necesario desarrollar protocolos de propagación masiva que aseguren altos porcentajes de regeneración clonal tal como la técnica de embriogénesis somática. Así mismo, estudiar la variación genética dentro de las plantas regeneradas ofrece un mayor conocimiento de los alcances del protocolo de micropropagación en relación a la estabilidad genética de los materiales empleados. Objetivo: En el presente trabajo de investigación se evaluó la combinación de tres concentraciones y dos tipos de reguladores de crecimiento vegetal (RCV), la citocinina bencilaminopurina (BA) (1.0, 2.0 y 3.0 mgL-1) en combinación con tres concentraciones de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) (3.0, 4.0 y 5.0 mgL-1), para la inducción de embriones somáticos, además, se analizó la estabilidad genética de las plántulas regeneradas mediante marcadores moleculares tipo RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA, por sus siglas en inglés). Metodología: La embriogénesis somática se indujo a partir de explantes de hoja con distintos grados de desarrollo: primera hoja se consideró como explante maduro (PH) y la tercera hoja como explante joven (TH), obtenidas de una plántula de Phalaenopsis sp. var. Dudú cultivadas in vitro, de 15-20 cm de altura. Resultados: El mayor número de plantas regeneradas fue de 29.8 a los 135 días después de iniciado el cultivo (ddic) con 2.0 y 5.0 mgL-1 de BA y 2,4-D, respectivamente, utilizando como explante la TH en la respuesta morfogenética de los explantes regenerados, se observó una correlación entre la edad del explante y la concentración de RCV. El análisis de la variación genética mostró cambios en los patrones de bandeo, observando bandas polimórficas con los cuatro iniciadores utilizados, aludiendo variación somaclonal en las plantas regeneradas. Implicaciones: Los resultados obtenidos aportan una alternativa de regeneración, además de ofrecer una metodología para iniciar programas de mejoramiento genético en Phalaenopsis sp. var. Dudú. Conclusiones: Se logró la regeneración in vitro de Phalaenopsis sp. var. Dudú mediante embriogénesis somática, así como la detección de cambios genéticos en el material regenerado.Nowadays, a growing demand for hybrids of Phalaenopsis sp. exists to satisfy this demand it is necessary to develop protocols for massive propagation that ensure high percentages of clonal regeneration, such as somatic embryogenesis. Besides, studying genetic variation within regenerated plants offers a greater understanding of the suitability of the micropropagation protocol in relation with genetic stability of the materials used. Objective: The present research work aimed to evaluate three concentrations of two types of plant growth regulators (RCV). 6- benzylaminopurine cytokinin (BA) (1.0, 2.0 y 3.0 mgL-1) in combination with three concentrations of 2,4- diclorofenoxiacetic acid (2,4-D) (3.0, 4.0, 5.0 mgL-1), for the induction of somatic embryos. In addition, the genetic stability of the regenerated plants was analyzed using molecular markers type RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA). Methodology: The induction of somatic embryogenesis was induced from two leaf explants with different stages of develop from 15-20 cm in height Phalaenopsis sp. var. Dudú seedlings, cultivated in vitro; first leaf as mature explant (PH) and third leaf as young explant (TH). Results: The highest number of regenerated plants was 29.8 at 135 days after the start of the culture (ddic) with 2.0 and 5.0 mgL-1 of BA and 2,4-D, respectively, using TH as explant. In the morphogenetic response of the regenerated explants, a correlation was observed between the age of the explant and the RCV concentration. Polymorphic bands were observed with the four primers used, indicating somaclonal variation in regenerated plants. Implications: The results obtained provide an alternative for regeneration, as well as offering a methodology to initiate genetic improvement programs in Phalaenopsis sp. var. Dudú. Conclusions: In vitro regeneration of Phalaenopsis sp. var. Dudú by somatic embryogenesis was achieved, as well as the analysis of the genetic integrity of the regenerated material.UNIVERSIDAD AUTONOMA DEL ESTADO DE MEXIC