Détection et pertinence clinique des Cellules Tumorales Circulantes (CTC) dans le Carcinome à Cellules de Merkel : Détermination du statut viral MCPyV des CTC vs biopsies tissulaires

Merkel Cell Carcinoma (MCC) is a rare and aggressive skin cancer with an unfavorable prognosis related to early metastatic dissemination. The early detection is a major issue to improve the patient’s overall survival. Circulating Tumor Cells (CTCs) are cells that detached from solid tumor, go into the circulating system and can form distant metastasis. Their detection, by the liquid biopsy, can bring many clinical information, including early detection of cancer relapse.This thesis was aimed at detecting CTCs in Merkel Cell Carcinoma through the development of a new detection method in this malignancy. This R-D method (combining RosetteSep and DEPArray technologies) was compared to CellSearch, the Gold-Standard for CTC detection, in a cohort of 28 MCC patients. These two methods appeared complementary for CTC detection and the results were correlated with tumor stage. A second objective was to investigate the expression pattern of the Merkel cell Polyomavirus (MCPyV), involved in 80% of Merkel Cell Carcinoma overall, in single CTCs vs single cells isolated from tumor biopsies. This expression was heterogeneous in both sample subsets, a data not previously established. Finally, we tried to establish in-vitro cultures of CTCs isolated from patients’ blood samples but optimal conditions could not be set up to date.This work provides robust grounds for future clinical investigations carried out on larger cohorts of patients especially regarding the clinical relevancy of CTC detection as prognostic factor and outcome predictor in Merkel Cell Carcinoma, and for biological studies investigating MCPyV role in oncogenesis and systemic dissemination patho-mechanisms in this malignancy.Le Carcinome à cellules de Merkel (CCM) est une tumeur cutanée rare et agressive, de mauvais pronostic. La détection précoce de la tumeur primaire et des rechutes est un enjeu majeur pour améliorer la survie des patients. Les Cellules tumorales circulantes (CTC) peuvent se détacher des tumeurs solides, passer dans le sang et vont pouvoir former des métastases. Leur détection, la biopsie liquide, peut apporter de nombreuses informations cliniques pertinentes notamment pour identifier précocement les rechutes.Le but de cette thèse a été l’identification des CTC dans le CCM grâce notamment à la mise au point d’une nouvelle méthode de détection. Cette méthode dite R-D a été comparée au CellSearch, Gold-Standard pour la détection des CTC chez 28 patients atteints de CCM. Ces deux méthodes apparaissent complémentaires dans la détection des CTC et les résultats sont corrélées au stade de la maladie. Un seuil de détection associé à la présence de métastases a été défini et doit être valider cliniquement pour la détection précoce de la dissémination de la maladie. Dans une seconde partie, l’objectif a été de rechercher la présence du polyomavirus du CCM (MCPyV), impliqué dans 80% des cas de CCM, dans les CTC individuelles ainsi que dans les cellules tumorales issues de biopsie tissulaire. Sa présence s’est révélée hétérogène à l’échelle cellulaire dans ces deux types d’échantillons, donnée non connue à ce jour. Enfin, nous avons tenté de mettre en culture in-vitro des CTC issues de prélèvements de patients, sans parvenir, pour le moment, à identifier les conditions idéales.Ce travail fournit des bases solides pour de futures études cliniques incluant des cohortes plus larges, afin notamment de déterminer l’intérêt clinique des CTC comme marqueur pronostique et évolutif du CCM, mais également pour des études biologiques sur les mécanismes oncogéniques (dépendant notamment du MCPyV)