Morphogenetic and virulence variability of massal and monosporic populations of Colletotrichum lindemuthianum, and occurrence of C. cliviae, for the first time, in Phaseolus vulgaris

Bean anthracnose caused by the fungus Colletotrichum lindemuthianum, is the most importante disease of crop. The fungus has high morphological, pathogenic and genetic variability, included found between isolates from same race. There are few studies that explore the variability that exists within massal population, and the use of a single monosporic culture per isolate is standardized. The aime of this study was evaluate the morphological, pathogenic and genetic variability of monosporic populations of the same mass population of C. lindemuthianum. Bean samples from different regions of Rio Grande do Sul, twelve mass isolates and ten monosporic from each massal were obtained, 131 isolates totally. Each Massal isolates were identified by the binomial system in bean differentiators. Morphocultural characterization was performed, considering the shape and color of the colonies, mycelial growth index, final colony diameter, sporulation and conidia shape. The differences were found by multivariate analysis and by the Scott-Knott test 5%. Forty-three isolates were selected to assess virulence when inoculated in seedlings, and transmission rate when inoculated in seeds of Pérola cultivar. From sixtysix isolates molecular characterization was performed using six URP markers. Similarity dendrograms were constructed using the UPGMA method using the Jaccard coefficient. As results, races 64, 75, 81, 337, 377, 857, 1361, 2041 and 2045 were identified. Morphological differences were found between monosporics from the same mass population, with emphasis on the isolates of LSPCL1, LPSCL15 and LSPCL20. Results of virulence and seed-seedling transmission showed differences in seedling disease rates and transmission rates between monosporic isolates, being expressive within the groups of isolates LPSCL15, LSPCL16 and LSPCL18. Molecular analysis demonstrated the existence of genetic variability among monosporic isolates from a mass population, mainly within the population of LPSCL20, LSPCL16 and LSPCL11 isolates. On the other hand, from leaves with anthracnose symptoms, was isolated a pathogen shown reproductive structures associated with sexual phase in fungi. Morphological, pathogenic and genetic characterization was performed to identify the causal agent. The fungus showed formation of periteciums, unitunicated asci and ellipsoid to curved ascospores, in Mathur culture medium. The pathogenicity test showed that the fungus caused lesions on Campeiro bean leaves and formed fertile periteciums on their surface. The molecular analysis of the ITS2, GAPDH and TUB2 regions, revealed that the new causal agent of disease in bean corresponds to the teleomorphic phase of C. cliviaeCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESA antracnose do feijão causada pelo fungo Colletotrichum lindemuthianum, é a principal doença que acomete a cultura. O fungo possui elevada variabilidade morfológica, patogênica e genética constatada inclusive entre isolados de uma mesma raça. Pouco são os trabalhos que exploram a variabilidade existente dentro de uma população massal, sendo padronizado o uso de uma única cultura monospórica por isolado. O trabalho teve como objetivo avaliar a variabilidade morfológica, patogênica e genética de populações monospóricas de uma mesma população massal de C. lindemuthianum. A partir de amostras de feijão de diferentes regiões do Rio Grande do Sul, foram obtidos doze isolados massais, e dez monospóricos de cada massal, para um total de 131 isolados. Foi identificada a raça de cada isolado massal pelo sistema binomial nas diferenciadoras de feijão. Foi realizada a caracterização morfocultural, considerando o formato e cor das colônias, índice de crescimento micelial, diâmetro final da colônia, esporulação e formato dos conídios. As diferenças foram constatadas por analise multivariada e pelo teste de Scott-Knott 5%. Foram selecionados 43 isolados para avaliação da virulência quando inoculados em plântulas, e taxa de transmissão quando inoculados em sementes da cultivar Pérola. A partir de 66 isolados, foi realizada a caracterização molecular utilizando seis marcadores URP. Foram construídos dendrogramas de similaridade pelo método UPGMA utilizando o coeficiente de Jaccard. Como base os resultados, foram identificadas as raças 64, 75, 81, 337, 377, 857, 1361, 2041 e 2045. Foram constatadas diferenças morfológicas entre monospóricos de uma mesma população massal, com destaque para os isolados de LSPCL1, LPSCL15 e LSPCL20. Resultados de virulência e transmissão semente-plântula mostraram diferenças nos índices da doença em plântula e taxas de transmissão entre isolados monospóricos, sendo expressiva dentro dos grupos de isolados LPSCL15, LSPCL16 e LSPCL18. A análise molecular demonstrou a existência de variabilidade genética entre isolados monospóricos de uma população massal, principalmente dentro da população de isolados de LPSCL20, LSPCL16 e LSPCL11. Por outro lado, a partir de folhas com sintoma de antracnose foi isolado um patógeno apresentando estruturas reprodutivas associadas à sexuada de fungos. Foi realizada a caracterização morfológica, patogênica e genética para a identificação do agente causal. O fungo apresentou a formação de peritécios, ascas unitunicadas e ascósporos elipsoides a curvos, em meio de cultura Mathur. O teste de patogenicidade demonstrou que o fungo causou lesões em folhas de feijão Campeiro e formou peritécios férteis na superfície das mesmas. A análise molecular das regiões ITS2, GAPDH e TUB2, revelaram que o novo agente causal de doença em feijão corresponde a fase teleomórfica de C. cliviae