Étude du recrutement des complexes de remodelage de la chromatine chez la levure Saccharomyces cerevisiae

La transcription des gènes est un processus finement régulé. Les composantes de la chromatine, les complexes de remodelage de la chromatine ainsi que la machinerie transcriptionnelle elle-même sont directement impliqués dans cette régulation. Dans le cadre des travaux de doctorat présentés ici, j'ai étudié les implications et les interrelations entre ces diverses protéines qui régulent l'expression des gènes. J'ai donc utilisé l'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) pour étudier le recrutement des complexes de remodelage et de la machinerie transcriptionnelle lors de l'activation du gène modèle GAL1 chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Dans un premier temps, mes travaux ont démontré que le complexe ATP-dépendant Swi/Snf est recruté à l'UAS[indice inférieur G] des gènes GAL1 et GAL7 suite à l'induction au galactose. De plus, l'activateur Gal4 n'est pas suffisant pour assurer le recrutement de Swi/Snf. Les interactions de Swi/Snf avec le Médiateur, les TAF[indice inférieur II], et l'ARN polymérase II sont aussi importantes et suffisantes pour permettre le recrutement de Swi/Snf. Au contraire, l'acétylation de l'histone H3 par Gcn5 et le complexe SAGA ne sont pas requis pour recruter ou maintenir le complexe Swi/Snf à GAL1. Dans un deuxième temps, ces travaux ont permis de mettre en évidence les différents impacts de deux composantes chromatimennes spécialisées, soit la variante d'histone H2A.Z et la protéine HMG Nhp6a/b. J'ai démontré le rôle crucial de la variante d'histone H2A.Z pour le recrutement des complexes de remodelage au promoteur du gène GAL1. En absence de H2A.Z, le recrutement du Médiateur, de SAGA ainsi que de Swi/Snf est grandement affecté ou aboli même si l'activateur Gal4 est toujours en mesure de se lier à l'UAS[indice inférieur G]. Une précédente étude dans le laboratoire avait démontré que le recrutement de TBP et de l'ARN polymérase II est également diminué dans le mutant [Delta]htz1. Ces résultats suggèrent que la variante d'histone H2A.Z crée une structure chromatinienne spécialisée requise pour l'assemblage du complexe de pré-initiation de la transcription. Au contraire, la protéine HMG Nhp6a/b ne semble pas directement impliquée dans la régulation de la transcription, du moins au gène GAL1. En somme, la régulation de l'expression du gène GAL1 nécessite donc la coordination d'une panoplie de protéines impliquées dans l'intégration du signal inducteur, le remodelage de la chromatine et la synthèse de l'ARNm