Rôle du facteur de transcription CDP dans l'épithélium intestinal colonique et dans la prolifération cellulaire

Le rôle du facteur de transcription CDP dans la répression colonique du gène de la sucrase-isomaltase (SI) durant le développement murin a récemment été démontré. L'implication de CDP dans le maintien de l'intégrité fonctionnelle de l'épithélium colonique demeure toutefois inexplorée. Le but général de ce présent travail fut donc de mieux comprendre le rôle de CDP dans le côlon. Tout d'abord, une étude différentielle par criblage de micropuces à ADN a permis d'identifier PLZF comme un gène cible de CDP dans le côlon. Un des objectifs de cette étude fut donc de caractériser l'interaction entre le facteur de transcription CDP et le gène PLZF. Une analyse informatique du gène PLZF a prédit 21 sites potentiels de liaison pour le facteur CDP. Un gel de rétention permettant l'étude des sites potentiellement liés par CDP dans une région du gène qui contient le plus de sites potentiels de liaison, soit la région de 3 kb 5'-UTR située en amont du site d'initiation de la traduction, a identifié cinq sites sur lesquels CDP a la capacité de se lier. Des essais luciférases ont montré une réduction de l'activité transcriptionnelle de la région de 3 kb 5'-UTR du gène PLZF par CDP. Une analyse Western a permis de corréler les niveaux d'expression de CDP et de PLZF dans les lignées d'adénocarcinomes de côlon humain. La protéine CDP p200 n'est pas détectée dans les lignées cancéreuses colorectales alors qu'elle est exprimée dans le tissu foetal sain de côlon humain. Au contraire, la protéine PLZF est fortement exprimée dans la majorité des lignées, mais elle n'est pas détectée dans les colonocytes foetaux humains normaux. Une analyse par PCR quantitatif en temps réel a montré que l'absence d'expression de CDP p200 dans la plupart des cellules n'est pas corrélée avec une diminution des niveaux d'expression du messager de CDP. Le second objectif de ce travail consistait à approfondir la fonction de la protéine CDP dans l'épithélium colonique. La protéine CDP p200 est la seule isoforme retrouvée selon un gradient d'expression le long de l'axe vertical de la crypte colonique tel que démontré par analyse Western. Une analyse de la prolifération cellulaire de la lignée stable Caco 2/15 qui surexprime CDP a permis d'observer une augmentation du rythme prolifératif des cellules Caco 2/15 CDP par rapport aux cellules contrôles. Cet accroissement de la prolifération corrèle avec une plus grande production de la forme clivée de CDP p110 comme démontré par analyse Western. Le traitement des cellules au MG132 a permis de déterminer que la voie d'inhibition du protéasome semble stabiliser la production de CDP p200. Enfin, des résultats préliminaires concernant le rôle de CDP dans la tumorigénèse intestinale ont permis de mettre en évidence une expression de CDP p110 dans les polypes coloniques de souris APC/Min. Les résultats de cette étude suggèrent que le gène PLZF est une cible transcriptionnelle de CDP et que le facteur CDP est impliqué dans le maintien d'un épithélium colonique fonctionnel