Étude du répertoire de récepteurs de cellules T par une nouvelle méthode

Une nouvelle méthode pour l'analyse du répertoire humain des récepteurs de cellules T (TCR) a été développée. Brièvement, cette méthode consiste à isoler l'ARN total du sang périphérique et d'en faire la synthèse en ADNc.Une première amplification par PCR est effectuée à l'aide d'amorces V et C-spécifiques de sorte qu'une famille V[bêta] soit amplifiée à la fois. Par la suite, une extension d'amorce est réalisée pour ajouter une cassette d'expression (séquence promotrice T7 et site de liaison au ribosome) en 5[prime] des TCRs.Une seconde amplification par PCR est effectuée avec une amorce 5[prime] située dans la cassette et une amorce 3[prime] dans la région C afin de générer suffisament de copies pour les étapes subséquentes de la méthode. L'ADN est ensuite transcrit en ARN par la transcription in vitro et l'ARN traduit en protéines par la traduction in vitro. Les protéines sont appliquées sur gel SDS-PAGE, la bande protéique d'intérêt est excisée du gel et est déposée sur gel de focalisation isoélectrique pour parvenir à séparer les protéines selon leur pI. Cette méthode permet principalement une analyse comparative de différents spécimens. A l'aide de la méthode, le patron de migration de 5 différentes familles V[bêta] (V[bêta]3, V[bêta]6, V[bêta]12, V[bêta]14 et V[bêta]18) ont été analysés.--Résumé abrégé par UMI