Embryo isolation and embryo culture conditions after vitrification of pronuclear stage embryos with superovulation in albina rats

Yüksek Lisans TeziÇekirdek öncesi (Pronükleer safhada (PN) embriyoları soğuk etkilerden korunması (kriyoprezervasyonu); hayvan üretiminde, transgenik teknolojide, insan embriyolojisinde ve gen bankacılığında önemli bir destekleyici teknoloji olmaktadır. Bu çalışmada 15 IU Gebe Kısrak Serum Hormonu (PMSG)-30 IU nsan Korionik Gonadotropin (hCG) ve 30 IU PMSG - 15 IU hCG hormon kompozisyonlarının çekirdek öncesi safhadaki embriyoların sayılarının üzerine etikleri karşılaştırılmıştır. Aynı zamanda , m-R1ECM-BSA, mR1ECM-PVA, KSOM, G1, HECM-1 kültür ortamları hem düşük (%5 CO2, %5 O2 ve %90 N2), hem de yüksek (%5 CO2 ve %95 Hava) Oksijen miktarları ve farklı deneylerde PN safhadaki embriyoların bölünme oranları analiz edilmiştir. Bu çalışmada ayrıca PN safhadaki embriyoların SSV yöntemi ile camsı ortam dondurma (vitrifikasyon) ve çözündürme sonundaki en iyi olan kültür ortamlarında embriyo bölünmeleri araştırılmıştır. Elde edilen sonuçlar, 30 IU PMSG - 15 IU hCG hormon karışımının süperovulasyon protokolünde anlamlı olarak daha iyi olduğunu göstermektedir. Aynı zamanda M16- mR1ECM-BSA ortamının yüksek oksijen konsantrasyonunda kullanılmasıyla en iyi kültür ortamının sağlandığı kararlaştırılmıştır. KSOM ve mR1ECM-BSA kültür ortamlarının karşılaştırılmasında, KSOM camsı ortam donndurmada 2 ve 4 hücreli safhalı embriyoya daha fazla oranda elde edilmiştir (68% ve 26% sırasıyla) ve sadece mR1ECM-BSA ortamı ile yapılan kültürlerde embriyolar, 8 hücreli safhaya gelmiştir. Sonuç olarak bu çalışmada süperovulasyon protokolü için en iyi hormon kompozisyonu olarak 30 IU PMSG - 15 IU hCG kullanılmıştır. Yüksek konsantrasyondaki oksijen ile M16-mR1ECM-BSA ortamları PN safhasındaki embriyoların kültürlerinde önerilebilir bir kültür ortamı olduğu kararlaştırılmıştır. Bununla beraber camsı ortam dondurma sonrasında embriyo kültüründe kullanılan mR1ECM-BSA ortamının KSOM ortamından daha umut verici olmaktadır.AbstractThe cryopreservation of pronuclear-stage (PN) embryos is one of the important supporting technologies for advanced animal husbandry, transgenic technology, human embryology and gene banking. In this study, we aimed to compare the 15 IU PMSG- 30 IU hCG and 30 IU PMSG-15 IU hCG hormone compositions on number of Pronuclear stage (PN) embryos. We also compare M16, m-R1ECM-BSA, mR1ECM-PVA, KSOM, G1, HECM-1 culture mediums in both Low (%5 CO2, %5 O2 and %90 N2) and High (%5 CO2 and %95 Air) Oxygen conditions and in separate experiment we analyzed division rate of PN embryos. In this study furthermore we analyze the optimal culture medium after SSV Vitrification and warming of PN embryos for outcome of embryo cleavage. Our results revealed that, 30 IU PMSG-15 IU hCG hormone composition found to be significantly better condition on superovulation protocol. Also we determined that M16- mR1ECM-BSA medium is the best culture conditions in high oxygen area. In comparation of KSOM and mR1ECM-BSA culture mediums 2 and 4 cell stage found higher in percentage in KSOM-vitrification (68% and 26% respectively) and only culture medium with mR1ECM- BSA reached 8 cell stage. In conlusion in this study ve optimised best hormon composition with 30 IU PMSG-15 IU hCG for superovulation protocols. According to our results higher oxygen consantration with M16 - mR1ECM-BSA medium is determined preferable condition for PN embryo culture. Finaly mR1ECM-BSA Vitrification is more promising method than KSOM- Vitrification in embryo culture