Implementación de una técnica para la determinación de permeabilidad de un principio activo en células caco-2 y/o células mdck

Tesis (Químico Farmacéutico)Una vez que ha vencido la patente de exclusividad en la comercialización de un producto farmacéutico, salen al mercado las copias del mismo. Esas nuevas presentaciones deben garantizar su equivalencia terapéutica respecto al producto de referencia. Los estudios tradicionalmente utilizados para ello son aquellos que comparan la biodisponibilidad del nuevo producto versus el producto original o el comparador establecido por la autoridad sanitaria respectiva. En los últimos años, en base al Sistema de Clasificación Biofarmacéutico (SCB), es posible demostrar la equivalencia terapéutica de algunas presentaciones a partir de los resultados de pruebas de disolución in vitro (Bioexención). Este sistema clasifica a los principios activos según sus características de permeabilidad intestinal y solubilidad. En nuestro país la autoridad sanitaria entrega los requisitos para optar por esta condición en la Guía Técnica G-BIOF 02. Para optar a una bioexención se debe demostrar que el principio activo es estable en los fluidos gastrointestinales y presenta una alta solubilidad en el rango de pH 1,2 a 6,8. Actualmente se procede además a documentar lo respectivo a la permeabilidad del principio activo en base a lo descrito en la bibliografia disponible que a la fecha, es insuficiente. La autoridad sanitaria chilena se ha planteado la necesidad de exigir estudios de permeabilidad como parte de los protocolos correspondientes a productos que opten por este sistema. Como respuesta ante este planteamiento, el presente trabajo se centró en la implementación de una metodología para el estudio de la permeabilidad de principios activos en modelos celulares (células Caco-2 y/o MDCK) en el Subdepartamento de Biofarmacia del departamento Agencia Nacional de Medicamentos del Instituto de Salud Pública de Chile. Los modelos celulares anteriormente mencionados están constituidos por monocapas celulares que presentan características morfológicas y bioquímicas similares a las de los enterocitos diferenciados, lo que permite su empleo en estos estudios dado su similitud con las condiciones del aparato intestinal. De los resultados obtenidos para determinar la permeabilidad de metformina, a partir de la pendiente en cada gráfico, se puede observar que la velocidad de permeación disminuye en el tiempo, lo que permite inferir que existe un mecanismo saturable. Al realizar un análisis comparativo entre las curvas obtenidas para metformina y propranolol se puede observar claramente que para el principio activo metformina hay una curva lineal lo que indica que para esta última, la velocidad de absorción se relaciona en forma directa con la concentración inicial en el lado apical. La forma de la curva del propranolol es distinta a la de metformina, dando cuenta de distintos mecanismos de absorción de ambos fármacos. Luego de la implementación de la técnica, se logró determinar la permeabilidad de los principios activos Metformina y Propranolol mediante la cuantificación de la cantidad de estos que permeó a través de la monocapa en un cierto tiempo, mediante una metodología validada en cromatografia líquida de alta resolución (HPLC) empleando un detector UV con arreglo de diodos