Estudio de la expresión estacional de la proteína H2A.Z durante el proceso de aclimatización del pez cyprinus carpio

Tesis (Químico Farmacéutico)El proceso de aclimatización es definido como el conjunto de mecanismos moleculares implicados en la adaptación natural de un organismo y desarrollados como respuesta a los cambios básicos de su hábitat. En este contexto, el pez Cyprinus carpio debe adaptarse a diversos cambios estacionales, como variaciones de temperatura y fotoperiodo observado durante el transcurso del año. Actualmente existen diversos estudios que permiten postular que, entre los mecanismos moleculares que coordinan la respuesta celular durante el proceso de adaptación, la reprogramación de la expresión génica aparece como uno de los mas esenciales. En células de carpas climatizadas se ha observado que, concomitante al fenomeno de reprogramación génica, el repertorio de proteínas varía durante la adaptación estacional. Un ejemplo de ellas es la histana variante macroH2A, perteneciente a la familia de variantes de la histona clásica H2A, la cual aumenta su expresión durante el invierno comparada con verano y está involucrada en la regulación de la estructura de la cromatina, sugiriendo que mecanismos epigenéticos participarían en la modulación de la respuesta molecular a los cambios estacionales. Además de macroHSA, pertenecen a esta familia las variantes H2A.x H2A-Bbd, H2AvD y H2A.Z. El presente trabajo centrará su atención en la variante de histona H2A.Z. Antecedentes actuales indican que H2A.Z estaría involucrada en el mantenimiento de la homeostasis celular, resultando interesante estudiarla para comprender los mecanismos moleculares que surgen concomitantes al fenómeno de aclimatización estacional de la carpa. Para ello, se amplificó la secuencia codificante de H2A.Z empleando partidores específicos para facilitar la construcción de un vector de expresión. El amplificado resultante fue clonado en un vector de expresión inducible (pET-22b(+)) con el cual se sobreexpresión y purifico la proteína recombinante. La pureza de la preparación fue evaluada mediante geles SDS-PAGE y se utilizó para validar la reacción cruzada del anticuerpo comercial anti-H2A.Z de humano