New strategies for lupus diagnosis

Mestrado em Tecnologias Moleculares em SaúdeO lúpus eritematoso sistémico (LES) é uma doença inflamatória autoimune crónica, com uma maior prevalência em mulheres. Caracteriza-se pela produção de autoanticorpos, que causam lesões em vários órgãos, podendo levar à redução da função física, alta morbidade e baixa qualidade de vida. Atualmente, o diagnóstico de LES depende da ocorrência de pelo menos quatro dos onze critérios definidos pelo Colégio Americano de Reumatologia. No entanto, o diagnóstico precoce está condicionado pela complexidade da doença e pela variedade de sintomas que apresenta, sendo que muitos dos sintomas também se encontram associados a outras doenças autoimunes. Esta dificuldade tem graves consequências em termos de prognóstico, pois condiciona a adoção de um regime terapêutico adequado em fases mais precoces da doença. Desta forma, é urgente o desenvolvimento de novos biomarcadores específicos de LES. Tendo em conta o potencial papel da formação de adutos covalentes de proteínas na etiologia do LES, este trabalho teve como objetivo verificar se os adutos covalentes formados entre a Albumina do Soro Humano (HSA) e metabolitos reativos específicos poderiam ser utilizados para o diagnóstico diferencial desta doença autoimune. Para isso, analisou-se por espectrometria de massa de alta resolução acoplada à cromatografia líquida (LC-HRMS) a HSA isolada do sangue de quatro grupos: 1) doentes de LES (n=19); 2) doentes de artrite reumatoide (AR) (n=22); 3) doentes de espondilite anquilosante (AS) (n=23); e 4) de um grupo de controlos saudáveis (n=26). Para a procura dos adutos covalentes alvo nas amostras clínicas, fez-se uma análise direcionada, auxiliada pela comparação com adutos padrão, preparado in vitro por modificação covalente de hemoglobina (Hb) e HSA com os correspondentes metabolitos reativos. A análise dos adutos padrão possibilitou a construção de uma base de dados que foi depois utilizada na procura destes possíveis biomarcadores nas amostras clínicas, utilizando o software TASQ 1.4. Muito embora não tenha sido possível identificar nenhum dos adutos alvo nas amostras clínicas analisadas, a criação da base de dados representa uma ferramenta fundamental para um melhor conhecimento do papel destes metabolitos reativos tanto no LES como em outras doenças.ABSTRACT - Systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic autoimmune inflammatory disease, with a higher prevalence in women. It is characterized by the production of autoantibodies, which cause multiorgan damage that can lead to reduced physical function, high morbidity, and low quality of life. Currently, the diagnosis of SLE depends on the occurrence of at least four of the criteria defined by the American College of Rheumatology. However, early diagnosis is conditioned by the complexity of the disease and the variety of symptoms it presents, and many of the symptoms have also been identified as associated with other autoimmune diseases. This difficulty has serious consequences in terms of prognosis, as it conditions the adoption of an adequate therapeutic regimen at earlier stages of the disease. Therefore, the development of new SLE-specific biomarkers is urgent. Taking into consideration the potential role of protein covalent adducts formation in LES, this study was aimed at exploring whether covalent adducts formed between blood proteins and specific reactive metabolites could be used for the differential diagnosis of this autoimmune disease. For this purpose, high-resolution mass spectrometry coupled with liquid chromatography (LC-HRMS) was used to analyze the human serum albumin (HSA) isolated from the blood of four groups: 1) SLE patients (n=19); 2) patients with rheumatoid arthritis (RA) (n=22); 3) ankylosing spondylitis (AS) patients (n=23); and 4) from a group of healthy controls (n=26). A targeted analysis was performed, assisted by comparison with standard adducts, prepared in vitro upon incubation of hemoglobin and HSA with target reactive metabolites. The analysis of standard adducts enabled the construction of a database that was then used to search for these possible biomarkers in clinical samples, using the TASQ 1.4 software. Although no target adduct was identified in the clinical samples, the creation of the database represents a fundamental tool for a better understanding of the role of target reactive metabolites not only in SLE but also in other diseases.N/